[发明专利]用于分析受试者血样中疾病标记物的存在的方法

权利要求书

1.一种分析受试者血样中疾病标记物的存在的方法，所述方法包括下述步骤：

a)从所述血样的无核血细胞，优选凝血细胞中提取核酸，以提供无核血细胞提取的核酸片段；以及

b)分析所述无核血细胞提取的核酸片段中疾病标记物的存在；

其中，所述疾病标记物是所述受试者的有核细胞的基因中的疾病特异突变；或

其中，所述疾病标记物是所述受试者的有核细胞的基因的疾病特异表达谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述无核血细胞是凝血细胞或红细胞，优选凝血细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、皮肤疾病、眼疾病、内分泌疾病、神经紊乱以及心血管疾病组成的组。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述疾病是癌症，优选其中所述癌症是优选选自结肠、胰腺、脑、膀胱、乳腺、前列腺、肺、乳腺、卵巢、子宫、肝、肾、脾、胸腺、甲状腺、神经组织、上皮组织、淋巴结、骨、肌肉和皮肤的实体肿瘤癌症。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述疾病特异突变发生在染色体基因内，或其中，所述疾病特异表达谱是染色体基因的表达谱。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述核酸是核糖核酸(RNA)，优选mRNA。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，分析所述无核血细胞提取的核酸片段中疾病标记物的存在的所述步骤b)包括选择性扩增：

i)所述突变，使用至少一种核酸突变特异扩增引物或探针，通过反转录酶聚合酶链反应扩增，或

ii)多个mRNA，通过反转录酶聚合酶链反应扩增，以确定编码所述mRNA的染色体基因的表达水平，由此以提供所述基因的表达谱，并将所述表达谱与参考谱进行比较。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法是诊断受试者所述疾病方法的一部分，并且其中，所述无核血细胞提取的核酸片段中所述疾病标记物的存在表明所述受试者患有所述疾病。

9.一种用于确定受试者的疾病阶段或疾病治疗的疗效的方法，包括下述步骤：

使用根据权利要求1～8中任一项所述的方法在第一时间点分析受试者血样中疾病标记物的存在，由此提供所述受试者中所述疾病标记物的含量的第一值；

使用根据权利要求1～8中任一项所述的方法在第二时间点分析所述受试者血样中疾病标记物的存在，由此提供所述受试者中所述疾病标记物的含量的第二值，其中，所述受试者已经在所述第一时间点和所述第二时间点之间接受过疾病治疗；以及

比较所述第一值和所述第二值以确定所述受试者的所述疾病治疗的疗效。

10.一种用于确定受试者的疾病阶段的方法，包括下述步骤：

使用根据权利要求1～8中任一项所述的方法分析受试者血样中疾病标记物的存在，由此提供所述受试者中所述疾病标记物的含量的测试值；

提供所述疾病标记物的含量的参考值，其中，所述参考值与疾病的特定阶段相关；以及

比较所述测试值和所述参考值以确定所述受试者的疾病阶段。

11.一种适于实施根据权利要求1～10中任一项所述的方法的部件的试剂盒，包括包装材料的所述试剂盒包括下述至少之一：

用于盛放从受试者血样中分离的无核血细胞的容器；

用于从所述无核血细胞中提取核酸的试剂；

用于通过反转录酶聚合酶链反应扩增由提取自所述无核血细胞的所述核酸选择性扩增所述受试者的有核细胞的基因中的疾病特异突变的试剂；以及

用于实施根据权利要求1～10中任一项所述的方法的印刷操作指南或电子操作指南，

所述试剂盒还包括：

所述疾病标记物的参考标准，其中，所述参考标准指示出所述无核血细胞提取的核酸片段中所述疾病标记物的存在或不存在。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，

其中，所述参考标准是健康的对照受试者或患有所述疾病的对照受试者的凝血细胞中包括所述疾病特异突变的核酸的含量的参考值，或

其中，所述参考标准是来自健康的对照受试者或患有所述疾病的对照受试者的无核血细胞中的所述多个mRNA的参考表达谱。