[发明专利]Serpin-finger融合多肽

说明书

本发明涉及包含serpin-finger多肽和第二个肽、多肽或蛋白质的融合多肽，以及此类融合多肽的用途。

发明背景

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)调节许多生理学通路，例如炎症、凝固、纤维蛋白溶解、细胞凋亡和胞外基质重建。丝氨酸蛋白酶切割serpin的反应环，并且通过破坏催化位点使所述丝氨酸蛋白酶失活。

α1-抗胰蛋白酶是394个氨基酸的52kDa糖蛋白，其由肝细胞、巨噬细胞和肠上皮细胞和支气管上皮细胞合成。晶体结构显示α1-抗胰蛋白酶由5个β-片层、9个α-螺旋和暴露的移动的反应环组成，所述反应环包含14个残基，呈现了作为靶蛋白酶的假底物的肽序列。切割易断裂的反应键(表示为P1-P1′)导致不可逆的构象改变，其中环的N-端残基被完全掺入到α1-抗胰蛋白酶的β-片层中间，作为链4a(Schechter，I.和Berger，A.，Biochem.Biophys.Res.Commun.27(1967)157-162；Loebermann，H.等人，J.Mol.Biol.177(1984)531-557；Baumann，U.等人，J.Mol.Biol.218(1991)595-606；Baumann，U.等人，J.Mol.Biol.226(1992)1207-1218；Mourey，L.等人，Biochim.72(1990)599-608；Mourey，L.等人，J.Mol.Biol.232(1993)223-241)。

在被靶蛋白酶蛋白水解切割后，P1Met和P1′Ser分开，并且未被活化的活性位点环插入到反平行的β-片层A中，作为链4a。具有链4a的氨基酸序列的肽(人α1-抗胰蛋白酶的345-358位残基Thr-Glu-Ala-Ala-Gly-Ala-Met-Phe-Leu-Glu-Ala-Ile-Val-Met)与完整的α1-抗胰蛋白酶结合，并形成具有与裂解的α1-抗胰蛋白酶相似性质的化学计量复合体(Schulze，A.J.等人，Eur.J.Biochem.194(1990)51-56)。

在WO 97/024453中，报道了用于将病毒和颗粒整合和内化到靶细胞中的受体特异性的嵌合病毒表面多肽。EP 0 147 761中报道了与水溶性的聚合物共价连接的α1-抗胰蛋白酶-蛋白酶抑制剂复合体。US 2006/0040867中报道了丝氨酸蛋白酶活性的抑制剂，及其在用于细菌感染治疗的方法和组合物中的用途。

Schulze，A.J.等人报道了通过序列上与β-链S4A相似的肽进行的α-1抗胰蛋白酶的结构转变(Eur.J.Biochem.194(1990)51-56)。Congote，L.F.在Anti-infective agents in medicinal chemistry，Bentham Science publishers，Hilversum(NL)，7(2008)126-133中报道了基于serpin C-末端肽中存在的氨基酸序列的多功能抗HIV剂。Qi，Z.等人(J.Biol.Chem.283(2008)30376-30384)报道了合理设计的抗HIV肽，所述肽含有作为分子探针的多功能结构域，用于研究第一代和第二代HIV融合抑制剂的作用机制。WO 01/51673中报道了用于抑制膜融合相关事件(包括HIV传播)的方法和组合物。WO 02/063017中报道了整联蛋白结合的嵌合体。EP 0 355905中报道了具有抗HIV作用的肝素片段和碎片。WO 00/52034和US 6,849,605中报道了用于治疗病毒感染的丝氨酸蛋白酶活性的抑制剂、方法和组合物。

发明概述

已发现，为了允许与serpin足够快的结合，serpin-finger多肽必须具有最小数目的氨基酸残基。此外，已发现serpin-finger多肽的第2位氨基酸(自serpin-finger多肽的N-末端起计数)处的氨基酸残基为谷氨酸是有益的。

本文中报道的serpin-finger融合多肽包含

-serpin-finger多肽，和

-另一个多肽，

其中，另一个多肽可以是发挥生物学活性，例如抑制、激活、结合或标记的任意多肽。

在一个实施方案中，serpin-finger融合多肽还包含至少一个

-肽接头多肽，

-蛋白酶切割位点，

-标签。