[发明专利]用于纯化聚乙二醇化的促红细胞生成素的方法有效
| 申请号： | 201180044060.8 | 申请日： | 2011-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN103118708A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 罗伯托·法尔肯施泰因;沃尔夫冈·克恩莱因;沃尔夫冈·库内;哈特穆特·舒里希（死亡） | 申请（专利权）人： | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 |
| 主分类号： | A61K47/48 | 分类号： | A61K47/48;B01D15/36 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 王旭;吴小明 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 纯化 聚乙二醇 红细胞 生成 方法 | ||
1.一种用于获得蛋白的方法，所述蛋白包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基，所述方法包括下述步骤：
a)将溶液施加于包含SP Sephacryl S500HR色谱材料的柱，所述溶液包含促红细胞生成素以及促红细胞生成素与聚(乙二醇)的缀合物的混合物，在所述缀合物中每个促红细胞生成素分子具有一个或多个聚(乙二醇)残基，所述柱已经施加了具有约21mS/cm的电导率的溶液，
b)将具有约21mS/cm的电导率的溶液施加于所述柱，由此回收游离的聚(乙二醇)和包含2个或更多个聚(乙二醇)残基的蛋白，
c)向所述柱施加溶液，并由此分别回收包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基的蛋白和促红细胞生成素，其中首先回收包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基的蛋白，所述溶液具有线性地递增的一直到约62.5mS/cm的最终值的电导率。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述具有约21mS/cm的电导率的溶液是pH值为pH2.5至pH3.5的溶液。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述具有约21mS/cm的电导率的溶液是pH值为pH2.5至pH3.5的磷酸(盐)缓冲溶液。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，未将所述包含促红细胞生成素以及促红细胞生成素与聚(乙二醇)的缀合物的混合物的溶液调至约21mS/cm的电导率，在所述缀合物中每个促红细胞生成素分子具有一个或多个聚(乙二醇)残基。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，具有线性地递增的电导率的所述溶液是具有线性地递增的氯化钠浓度的溶液。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，具有线性地递增的电导率的所述溶液的pH值为pH2.3至pH3.5。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述促红细胞生成素是人促红细胞生成素。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述人促红细胞生成素具有SEQ ID NO：01或SEQ ID NO：02的氨基酸序列。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述单个聚(乙二醇)残基具有20kDa至40kDa的分子量。
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