[发明专利]用于在细胞培养物中生产病毒的过程中除去外来因子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及改进的用于生产病毒、特别是用于药物（例如疫苗接种或基因治疗）中的病毒的方法。

背景技术

新近开发的用于生产包含病毒的药物(例如免疫原性的组合物或疫苗)的方法之一依赖于细胞培养物系统，特别是哺乳动物细胞培养物。通常，那些系统包括：用目标病毒感染细胞，并在细胞中复制和生产病毒足够的时间以后，从该细胞纯化病毒。在细胞上生产病毒的同时，可以在不同的生产阶段给该病毒添加其它原料(例如组织培养试剂、稳定剂)。因而，外来因子能潜在的通过这些成分中的任一种进入病毒产物中，并污染所述产物。在细胞底物上生产的病毒特别易于发生这类污染。已知外来因子（其中大部分是病毒）会污染生物材料例如细胞系。

发明内容

在第一方面，本发明提供了用于在细胞培养物中生产目标病毒的方法，该方法包括：使细胞群体与包含目标病毒的溶液接触，其中该细胞该对该目标病毒的感染是易感的，其特征在于，包含目标病毒的溶液和易感细胞之间的接触时间少于或等于120分钟。

在第二方面，本发明提供了用于生产目标病毒的方法，该方法包括下述步骤：

a)         使细胞群体与包含目标病毒的溶液接触少于或等于约120分钟的时间段，其中该细胞对该目标病毒的感染是易感的，

b)                   从该细胞除去包含目标病毒的溶液，和

c)                   在培养基中培养该细胞，以生产复制的目标病毒群体。

在第三方面，本发明提供了用于生产目标病毒的方法，该目标病毒用于药物中，该方法包括下述步骤：

a)                   使细胞群体与包含目标病毒的溶液接触少于或等于约120分钟的时间段，其中该细胞该对该目标病毒的感染是易感的，

b)                   从该细胞除去包含目标病毒的溶液，

c)                   在培养基中培养该细胞，以生产复制的目标病毒群体，和任选地

d)                   用合适的药用载体配制生产的病毒。

在第四方面，本发明提供了用于生产目标病毒的方法，该方法包括下述步骤：

a)              使细胞群体接触包含目标病毒和至少一种外来因子的初始溶液，其中该细胞对该目标病毒的感染是易感的，并且该接触时间段足以允许该目标病毒感染细胞群体的至少一个亚群，

b)              从该细胞除去该包含目标病毒和至少一种外来因子的溶液，

c)               在培养基中培养该细胞，以生产复制的目标病毒群体，其中在复制的目标病毒群体中的至少一种外来因子的DNA含量水平与在包含目标病毒和至少一种外来因子的初始溶液中存在的水平相比下降了至少90%。

在第五方面，本发明提供了用于在目标病毒复制过程中除去和/或减少外来因子发生率的方法，该方法包括下述步骤：

i)  给易感细胞接种病毒接种物，该病毒接种物包含目标病毒和一种或多种外来因子，

ii)              培养接种的细胞，和

iii)           在接种以后小于120分钟后，洗涤所述接种的细胞培养物。

在另一个方面，本发明提供了用于在细胞培养物上生产目标病毒的过程中除去外来因子的方法，该方法包括下述步骤：

a)                   使细胞群体接触包含目标病毒和至少一种外来因子的溶液少于或等于约120分钟的时间段，其中该细胞易于被目标病毒感染，

b)                   从该细胞除去包含目标病毒和至少一种外来因子的溶液，

c)                   在培养基中培养该细胞，以生产复制的目标病毒群体。

在另一个方面，本发明提供了一种用于在细胞培养物上生产目标病毒的过程中除去外来因子的方法，该方法包括下述步骤：