[发明专利]诱导型启动子在乙醇酸的产生中的用途

权利要求书

1.一种用于在发酵工艺中产生乙醇酸的方法，其包括下述步骤：

-在包含碳源的合适培养基中培养经修饰的微生物，

-在所述微生物中用外源刺激调节靶基因的表达，和

-从培养基回收乙醇酸，

其中在所述微生物中，涉及乙醇酸生物合成途径的至少一种靶基因的表达处于异源诱导型启动子的调控下，该启动子的活性受所述外源刺激的调节。

2.权利要求1的方法，其中所述外源刺激是物理或化学刺激。

3.权利要求2的方法，其中所述外源刺激是物理刺激，选自温度或光。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述所述诱导型启动子由温度诱导，并选自：

-由噬菌体λ的经修饰的抑制物调节的启动子，如：

■启动子PR或所述启动子PR的衍生物，

■启动子PL或所述启动子PL的衍生物，

-由温度敏感性Lac抑制物调节的经修饰的lac启动子。

5.权利要求4的方法，其中所述噬菌体λ的经修饰的抑制物是λ抑制物cI的温度不稳定等位基因，特别是λ抑制物等位基因cI857。

6.权利要求1-5的方法，其中在所述经修饰的微生物中，基因recA缺失。

7.权利要求1或2任一项的方法，其中所述外源刺激是化学刺激，所述刺激选自：

-碳分解代谢物的抑制中的变化；

-特定碳源的存在，或

-糖醇的存在。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中表达处于诱导型启动子的调控下的至少一种基因选自下组：icd，aceA，ycdW，pgi，pntAB，udhA，arcA，maeA，maeB，mdh，pck，ppc，ackA，pta，poxB，lldP，glcA，yjcG，ldhA和mgsA。

9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述icd基因表达处于异源诱导型启动子的调控下。

10.权利要求9的方法，其中诱导型启动子的使用允许icd基因在37℃至42℃表达，并在28℃至32℃抑制icd基因的表达。

11.权利要求1-10任一项的方法，其中在培养基中产生的乙醇酸的回收包括回收存在于培养基中的乙醇酸的衍生物和前体。

12.一种经修饰用于改善乙醇酸产生的微生物，其中在所述经修饰的微生物中，如权利要求1至11任一项所限定的，涉及乙醇酸生物合成途径的至少一种基因的表达处于异源诱导型启动子的调控下。

13.权利要求12的微生物，其中表达处于异源诱导型启动子的调控下的至少一种靶基因选自下组：icd，aceA，ycdW，pgi，pntAB，udhA，arcA，maeA，maeB，mdh，pck，ppc，ackA，pta，poxB，lldP，glcA，yjcG，ldhA和mgsA。

14.权利要求13的微生物，其中所述诱导型启动子的使用允许icd基因在37℃至42℃表达，并在28℃至32℃抑制icd基因的表达。

15.权利要求12-14任一项的微生物，其中所述乙醇酸产生在30世代之后为起始产生量的至少50%。