[发明专利]用于叶酸靶向剂的改进方法

说明书

相关申请交叉引用

本申请要求2010年5月19日提交的美国临时专利申请61/346,444和2010年6月3日提交的61/351,022的权益，各专利通过引用结合到本文中。

技术领域

本发明涉及用于制备叶酸靶向缀合物EC145的改进方法，用改进方法制备的缀合物EC145，和包含用改进方法制备的缀合物EC145的药物组合物。

发明背景和概述

叶酸靶向药物已开发并在临床试验中作为癌症治疗药试验。EC145包括高效长春花生物碱细胞毒性化合物，缀合到叶酸的去乙酰长春碱酰肼(DAVLBH)。EC145分子靶向在上皮瘤表面上发现的高水平叶酸受体，这些上皮瘤包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、子宫内膜癌和肾癌及其它癌，包括输卵管癌和原发性腹膜癌。相信EC145结合到表达叶酸受体的肿瘤，这种叶酸受体将长春花部分直接输送到癌细胞，同时避开正常细胞。因此，在结合后，EC145通过胞吞进入癌细胞，释放DAVLBH，并引起细胞死亡或抑制细胞功能。EC145具有下式：

，并已收录Chemical Abstracts Registry Number 742092-03-1。如本文所用，根据上下文，术语EC145意指所述化合物或其药学上可接受的盐，并且化合物可以离子化形式存在于固体、溶液或悬浮体，包括质子化形式。

EC145公开于美国专利7,601,332和WO 2007/022493，用于静脉内给药的特别用途和含水液体pH 7.4磷酸盐缓冲制剂公开于WO 2011/014821。

公开于美国专利7,601,332和WO 2007/022493的EC145的制备方法适用于以实验室规模制备EC145，例如，最多几十毫克，但在增大规模时可能出现问题。

在所公开的方法中，使用下式的硫醇

,

 ，也称为EC119，可通过与硫代磺酸或吡啶基二硫代活化长春碱中间体形成二硫键制备EC145。例如，在二氯甲烷(DCM)中制备下式的氨基甲酰基二硫化物中间体(CDSI)

并且按照硅胶层析法分离。然后使CDSI溶于四氢呋喃(THF)，并加到EC119的水溶液，其中用碳酸氢钠调节pH，以使EC119溶解。在反应完成后，关于小规模混合物(5-10mL)，可用旋转式蒸发器去除THF，然而，在真空下起泡可能太成问题，以至于在较大规模此操作不可行。因此，在反应完成后，将混合物用水稀释，冷冻，并冻干。然后使粗固体溶于水，并通过反相层析纯化。将具有大于90% EC145峰面积的层析级分合并，用水稀释，并冻干。一般纯化产率为在90-93%纯度30-40%的范围内。与冻干相关的体积使制备多于克量很难处理。

另外，在按比例放大时，已确定在反应混合物整理期间部分EC145由形成二硫键中释放的巯基吡啶分解。

已确定可抑制此分解，这提供本发明的一个方面。因此，作为一个实施方案，本发明提供一种制备EC145的方法，所述方法包括在pH小于8的含水缓冲剂存在下用下式的化合物

处理下式的化合物

其中X为烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基硫基或杂芳基硫基。在方法的一个实施方案中，X为2-硫基吡啶基或3-硝基-2-硫基吡啶基。在方法的一个实施方案中，X为2-硫基吡啶基。

对于任何上述，在一个实施方案中，缓冲剂具有小于约7的pH。在另一个实施方案中，缓冲剂具有小于约6.5的pH。在另一个实施方案中，缓冲剂具有5.9至6.3的pH。在另一个实施方案中，缓冲剂具有5.9至6.1的pH。

对于任何上述，在一个实施方案中，缓冲剂为磷酸盐缓冲剂。在另一个实施方案中，缓冲剂为磷酸钠缓冲剂。使用本文公开的缓冲剂比使用碳酸氢钠更好地控制pH和降解问题。

以上方法的另一个实施方案包括在pH 5.9至6.3的磷酸钠缓冲剂存在下用下式的化合物

处理下式的化合物

。

对于任何上述，一个实施方案为其中处理在包含乙腈的液体介质中进行的方法。

对于任何上述，另一方面为一种方法，所述方法进一步包括用式Y-CO-O-(CH2)2-S-X的酰化剂或其酸加成盐处理去乙酰长春碱酰肼的步骤，其中Y为离去基团，以形成包含下式的化合物的反应混合物

并用反应混合物直接处理下式的化合物

而不用分离下式的化合物