[发明专利]用于叶酸靶向剂的改进方法

权利要求书

1. 一种制备EC145的方法，所述方法包括在pH小于8的含水缓冲剂存在下用下式的化合物

处理下式的化合物的步骤

其中X为烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基硫基或杂芳基硫基。

2. 权利要求1的方法，其中X为2-硫基吡啶基或3-硝基-2-硫基吡啶基。

3. 权利要求1的方法，其中X为2-硫基吡啶基。

4. 权利要求1至3中任一项的方法，其中缓冲剂具有5.9至6.3的pH。

5. 权利要求4的方法，其中缓冲剂具有5.9至6.1的pH。

6. 权利要求1至5中任一项的方法，其中缓冲剂为磷酸盐缓冲剂。

7. 权利要求6的方法，其中缓冲剂为磷酸钠缓冲剂。

8. 权利要求1的方法，所述方法包括在pH 5.9至6.3的磷酸钠缓冲剂存在下用下式的化合物

处理下式的化合物的步骤

。

9. 权利要求1至8中任一项的方法，其中处理在包含乙腈的液体介质中进行。

10. 权利要求1至9中任一项的方法，所述方法进一步包括用式Y-CO-O-(CH2)2-S-X的酰化剂或其酸加成盐处理去乙酰长春碱酰肼的步骤，其中Y为离去基团，以形成包含下式的化合物的反应混合物

并用反应混合物直接处理下式的化合物

而不用分离下式的化合物

。

11. 权利要求10的方法，其中酰化剂为下式的化合物

，

或其酸加成盐。

12. 权利要求11的方法，其中酰化剂为下式的化合物

并且以酸加成盐的形式引入。

13. 权利要求11的方法，其中酰化剂为下式的化合物

，

并且以游离碱的形式引入。

14. 权利要求10至13中任一项的方法，其中去乙酰长春碱酰肼用酰化剂在包含乙腈的溶剂中处理。

15. 权利要求10至14中任一项的方法，其中去乙酰长春碱酰肼以高纯化形式提供。

16. 权利要求10至15中任一项的方法，其中用酰化剂处理去乙酰长春碱酰肼以生成包含下式化合物

；

的反应混合物的步骤和用反应混合物处理EC119的步骤在相同反应容器中进行。

17. 权利要求1至16中任一项的方法，所述方法进一步包括其中包含EC145的反应混合物用柠檬酸盐缓冲氯化钠水溶液稀释，并装到聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物树脂柱或柱体上纯化的步骤。

18. 权利要求17的方法，所述方法进一步包括使用包含乙腈和柠檬酸盐缓冲氯化钠水溶液的流动相从柱或柱体洗脱EC145产物。

19. 权利要求1至18中任一项的方法，所述方法进一步包括用超滤提供EC145作为水溶液中的纯化产物的步骤。

20. 权利要求1至19中任一项的方法，其中在任何步骤使用的水包含不超过约0.9ppm浓度的溶解氧。

21. 缀合物EC145，所述缀合物EC145通过权利要求1至20中任一项所述的方法制备。

22. 通过一种方法制备的缀合物EC145，所述方法包括在其中缓冲剂具有5.9至6.3的pH的含水缓冲剂存在下用下式的化合物

处理下式的化合物的步骤

，

其中X为烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基硫基或杂芳基硫基。

23. 权利要求22的缀合物，其中X为2-硫基吡啶基。