[发明专利]高热增强的体外免疫识别

权利要求书

1.一种用于产生测试抗原特异性细胞介导免疫应答的方法，该方法包括以下步骤：

(a)提供包含来自哺乳动物的能够产生细胞介导免疫应答的免疫系统细胞的样品，

(b)在至少一种测试抗原存在下对所述样品进行高热条件下孵育，

(c)测定所述样品中的所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答；

其中，与在37℃正常热条件下孵育所获得的基准水平相比，高热条件下孵育所产生的所述测试抗原特异性免疫应答增强。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过测量至少一种免疫信号分子的水平而测定所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述免疫信号分子是细胞因子或者趋化因子。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，通过测量mRNA和/或蛋白质的水平而测定所述免疫信号分子水平。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，利用从下组选择的方法来测定所述免疫信号分子水平：定量PCR、实时PCR和逆转录PCR、ELISA、酶联免疫斑点法(ELISPOT)、多功能流式点阵仪法、多重测定法、免疫印迹法、免疫层析横向流动测定、酶扩大免疫测定技术、放射性变应原吸附试验、放射性免疫测定、免疫荧光、以及各种免疫干棒分析法。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中，所述免疫信号分子选自：IP-10、INF-γ、IL-2、MIG、TNF-α、MIP-1a、MCP-1、MCP-2、MCP-3、IL-1b、IL-RA、sIL-2R、和IL-12。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述免疫信号分子是IP-10。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述免疫信号分子是IFN-γ。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤b中添加选自下组的至少一种免疫调节剂：细胞因子IL-7、IL-15、IL-21，结合IL-10、IL-4、IL-5的中和抗体，用抗CD25抗体包覆的珠，用抗CD39抗体包覆的珠，编码IL-10、JAK1或TYK2的遗传物质的正义和反义寡聚核苷酸，含寡聚核苷酸的CpG，用作TLR调节剂的寡聚核苷酸，以及TLR调节剂。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种测试抗原选自：ESAT-6、CFP-10、TB7.7、以及其他的RD-1和RD-11抗原。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品是全血或者从血液、胸膜液、支气管液、组织活体、腹水和/或脑脊髓液中获得的细胞。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品包含选自下组的细胞：外周单核细胞、T细胞、CD4T细胞、CD8T细胞、γ-δT细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、和NK细胞。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述高热条件是在38.5-41.0℃之间温度下的孵育。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述高热条件是在39-40℃之间温度下的孵育。

15.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤b中添加碳氢化合物和/或多糖形式的糖。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法提高所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答的信号/噪声比。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答用于诊断由能够表达所述测试抗原的微生物所引起的感染。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答用于检测疫苗接种应答。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述测试抗原特异性细胞介导免疫应答用于检测癌症或瘤或恶性肿瘤。

20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述微生物是选自分枝杆菌、利什曼原虫、衣原体、和巨细胞病毒。