[发明专利]HMGB1作为炎性肠病病情的生物标志物的用途、其在粪便样品中的非侵入性检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测、诊断和预测人类患者炎性肠病病情的非侵入性方法，其特征在于，所述方法检测所述患者的粪便样品中的HMGB1水平。

2.一种方法，其中将粪便样品中HMGB1水平的降低用作对给定治疗的应答标志物。

3.根据权利要求1的方法，其中所述的炎性肠病病情选自下组：慢性炎性肠病(IBD)，特别是克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(CU)。

4.根据权利要求1和2的方法，其中所述人类患者是患有IBD的儿科患者。

5.根据前述权利要求的方法，其特征在于，所述方法具有以下步骤：

·对所述粪便样品称重，并使其悬浮于PBS提取缓冲液中；

·对所述样品均质化，并对上清粪便提取物进行离心后的提取；

·通过Bradford测定法来评价所述蛋白质的浓度；

·通过蛋白质印迹法来分析所述粪便提取物。

6.根据前述权利要求的方法，其特征在于，在通过蛋白质印迹法对所述提取物进行分析期间，用抗HMGB1多克隆或单克隆抗体来温育转移至PVDF滤膜的所述粪便提取物。

7.根据前述权利要求的方法，其特征在于，所述抗HMGB1多克隆抗体是使用对应于人HMGB1氨基酸165-180的合成肽作为免疫原在兔中产生的，并且所述抗HMGB1单克隆抗体对应于产生自小鼠骨髓瘤与B细胞的融合的杂交瘤的克隆115603，所述B细胞获自采用纯化的源自大肠杆菌(E.coli)的重组人HMGB1蛋白免疫的小鼠。

8.根据权利要求5的方法，其特征在于，对所述粪便提取物的所述分析是通过ELISA测定法进行的。

9.根据前述权利要求的方法，其特征在于，将蛋白质印迹测定法中用到的同样的抗体用作进行所述ELISA测定法时的抗体。

10.根据前述权利要求的方法，其特征在于，所使用的抗HMGB1抗体为：使用对应于人HMGB1氨基酸165-180的合成肽作为免疫原在兔中产生的抗HMGB1多克隆抗体，以及对应于产生自小鼠骨髓瘤与B细胞的融合的杂交瘤的克隆115603的抗HMGB1单克隆抗体，所述B细胞获自采用纯化的源自大肠杆菌的重组人HMGB1蛋白免疫的小鼠。

11.一种根据前述权利要求的方法、基于抗原-抗体特异性反应检测人粪便样品中的HMGB1蛋白的比色试剂盒，其特征在于，所述抗体是抗HMGB1多克隆抗体或抗HMGB1单克隆抗体。

12.一种根据前述权利要求的比色试剂盒，其特征在于，所使用的抗HMGB1抗体为：使用对应于人HMGB1氨基酸165-180的合成肽作为免疫原在兔中产生的抗HMGB1多克隆抗体，以及对应于产生自小鼠骨髓瘤与B细胞的融合的杂交瘤的克隆115603的抗HMGB1单克隆抗体，所述B细胞获自采用纯化的源自大肠杆菌的重组人HMGB1蛋白免疫的小鼠。