[发明专利]使用血液中的循环黑素瘤细胞为黑素瘤患者预测临床结果的方法

说明书

背景技术

晚期黑素瘤的治疗因其异质性组织病理学和在肿瘤进展期间积累的构成变化而复杂化。对具有转移性乳癌或结肠直肠癌的患者的循环肿瘤细胞进行计数和表征已显示可提供在临床上重要且能够用于监测患者管理的独立的预后和预测信息。

循环肿瘤细胞(CTC)已显示是原发癌、可能治愈的疾病阶段以及持续为大多数恶性肿瘤的主要死亡原因的转移性疾病之间的关键环节。临床研究已表明，CTC是转移性乳癌的作用很强后和预测性生物标记，并且据报道在前列腺癌和结直肠癌领域已有类似发现。这些数据显示，CTC代表了驱动转移性癌的基础生物学，并且表明对这些细胞进一步的细胞和分子分析能够揭示对癌细胞转移的分子调控和对治疗的响应的新认识。

捕获、计数和表征CTC的方法已进行修饰以捕获、计数和表征患者的血液中的循环黑素瘤细胞(CMC)。参见于2008年10月20日提交的美国专利申请号12/254188，Automated Enumeration and Characterization of Circulating Melanoma Cells in Blood。本申请在此以引用方式并入。尽管CMC通过这种方法被捕获、计数和表征，但关于具有转移性黑素瘤的患者的短期生存的预测价值是未知的。本发明为具有转移性黑素瘤的患者提供预测总体生存的方法。

附图说明

图1：从全血中回收已知数目的掺料的SK-Mel 28细胞。将SK-Mel28细胞掺料到健康供体样品内(即，在2天中的每一天，将0、5、18、72、280和1183细胞掺料到来自五个健康供体的7.5mL血液内，在每种细胞水平具有总共5个不同样品。掺料的细胞的数目与观察到的回收的细胞的数目比较进行标绘。

图2：行A-E代表通过CellTracks软件鉴定为在来自黑素瘤患者的样品中具有DAPI和PE信号的物体。从右到左，索引图像代表Ki67FITC信号、CD45和/或CD34APC信号、DAPI信号、HMW-MAA PE信号、以及DAPI(紫色)和HMW-MAA(绿色)信号的重叠。行A中的细胞排除作为黑素瘤细胞，因为它表达CD45和/或CD34，行B和行C中的细胞分类为不表达Ki67的黑素瘤细胞，并且行D和行E中的细胞分类为的确表达Ki67的黑素瘤细胞。

图3：来自从黑素瘤患者的7.5mL血液获得的CellTracks的典型CMC图像的图库。

图4：来自44个转移性黑素瘤患者的79个样品在55个健康供体的7.5mL血液中的CMC的流行程度，小图A，以及在来自16个黑素瘤患者的19个样品中表达Ki67的CMC的百分比，小图B。

图5：对于具有＜2个循环黑素瘤细胞/7.5ml全血的那些和在7.5ml全血中具有≥2个循环黑素瘤细胞的组中那些，在具有转移性黑素瘤的患者中的总体生存的卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)概率评估。OS时间从每次血液抽取时开始计算。生存中值对于具有＜2个CMC的组的12.1个月与对于具有≥2个CMC的人的2.0个月比较(通过时序检验P＝0.001；在具有≥2个细胞/7.5ml的患者中的死亡风险比，3.2)。

具体实施方式

本发明包括预测具有转移性黑素瘤的患者的总体生存的方法，包括：

a)从具有转移性黑素瘤的患者获得7.5ml血样，所述样品包含怀疑含有循环黑素瘤细胞的混合细胞群；

b)富集所述样品的级分，所述级分包含所述循环黑素瘤细胞；

c)确认所述稀有细胞的结构完整性为未受损的；

d)分析所述未受损的稀有细胞；其中所述分析关联疾病进展；

e)评估所述血样中的循环黑素瘤细胞的数目

其中如果所述数目大于或等于2，预测所述患者的总体生存为低，并且

其中如果所述循环黑素瘤细胞的数目小于2，预测所述患者的总体生存为高。