[发明专利]游离的维生素D的免疫分析

说明书

技术领域

本发明涉及用于分析（测定）血液或血液成分样品的游离的维生素D（free vitamin D）的免疫分析（免疫测定，immunoassay）方法。本发明还涉及免疫分析和用于进行（引导，conduct）这样的免疫分析的试剂盒，其中所述免疫分析包括重点照顾检验（点照顾测试，point-of-care tests）。

背景技术

被称为“维生素D”的物质包括一组脂肪可溶解的激素原以及其代谢物和类似物。体内出现的维生素D的主要形式是维生素D₂（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化醇）。后者是维生素D的内源性形式，人类可在太阳光的影响下在皮肤中形成维生素D3。前者是从食物中摄取的维生素D的外源性形式。在美国，维生素D2被用作药物学维生素D补充物。除非另外指出，本公开内容中的术语维生素D涉及维生素D的任何一种或多种形式，包含维生素D代谢物如25-羟基-维生素D或1,25二羟基维生素D。

虽然维生素D₂和D₃在它们的侧链的分子结构方面不同，但是它们在现有的激素原中共有相同的生物活性，在两个步骤中，最终被代谢为也称为钙三醇（骨化三醇，calcitriol）的1,25二羟基维生素D（1,25-(OH)2-维生素D），或1,25二羟基胆钙化醇。前述的代谢物，25-羟基维生素D（25-(OH)-维生素D）或钙三醇，由肝中的转变产生，且其被认为是体内维生素D的贮藏形式。

循环的维生素D主要由25-(OH)-维生素D3和25-(OH)-维生素D2组成。生物学上，25-(OH)-维生素D2与25-(OH)-维生素D3一样有效。循环中25-(OH)-维生素D2的半衰期较短。对于临床实践，推荐使用25-(OH)-维生素D分析，其测量25-(OH)-维生素D3以及25-(OH)-维生素D2（1）。

维生素D长期已被认为是重要的物质，其活化形式在骨的形成和维持中以及在人类或动物身体的其他过程中发挥作用。因此，它通过促进肠内来自食物的钙和磷的吸收和肾中钙的重吸收，用于增加钙到血流中的流量；使骨能够正常矿化和预防低血钙性抽搐。其也是造骨细胞和破骨细胞的骨成长和骨重建所必需的。

维生素D缺乏引起削弱的骨矿化和导致骨软化疾病，儿童佝偻病和成人软骨病，并且可能产生骨质疏松症。

维生素D在人类健康中发挥许多其他的作用，包括抑制从甲状腺的降血钙素释放。降血钙素直接地作用于破骨细胞，引起骨再吸收和软骨降解的抑制。维生素D也能抑制从甲状旁腺的甲状旁腺激素分泌，调节神经肌肉和免疫功能和减少炎症。因此，具有适当的维生素D水平对于人类和动物的健康是基本的。

然而，维生素D的过量（其可能由于过量用药而发生）是有毒的。维生素D毒性的某些症状是由增加的肠钙吸收引起的血钙过多（血液中钙的水平升高）。已知维生素D毒性是高血压的原因。维生素D毒性的胃肠症状可包括厌食、恶心、和呕吐。这些症状常常伴随多尿（过多的产生尿）、烦渴（增加的口渴）、虚弱、神经过敏、瘙痒症（发痒）、和最终地肾衰竭。

明显地，能够诊断可能的维生素D缺乏的受试者是重要的。特别是对于补充维生素D的受试者，能够检验潜在的维生素D过量的受试者，也是重要的。总的25-(OH)-维生素D的血清水平被认为是维生素D状态的主要指示剂（2）。然而，这种观念一直都有争议。

通过维生素D结合蛋白（88%）和白蛋白（12%）结合血清中几乎所有循环的25-(OH)-维生素D。维生素D结合蛋白（DBP）是血清的主要成分，浓度为250-400mg/L血清。仅仅占据DBP的维生素D结合位点的小部分，大约为2%。25-(OH)-维生素D的非常小的部分（分数，fraction），0.04%以游离的、非蛋白质结合形式循环。

所有人类中DBP浓度都不是恒定的，并且可通过其他因素影响DBP的浓度，其他因素包括怀孕、口服避孕药的使用、肾病和肝病。DBP浓度的认识对于患者的真实的25-(OH)-维生素D状态的准确评价是至关重要的。例如，服用口服避孕药的年轻女性可能具有处于正常范围内的总的25-(OH)-维生素D水平。然而，由于她的升高的DBP，可显著地降低游离的25-(OH)-维生素D的浓度，使得她处于临床25-(OH)-维生素D不足的增加的风险之中和那个条件承担的所有风险之中。