[发明专利]游离的维生素D的免疫分析有效
申请号: | 201180027487.7 | 申请日: | 2011-04-01 |
公开(公告)号: | CN102985826A | 公开(公告)日: | 2013-03-20 |
发明(设计)人: | 米夏埃尔·弗朗西斯库斯·威廉默斯·科内利斯·马滕斯;乔治·亨利·帕森斯;弗朗西斯库斯·玛丽亚·安娜·罗斯马勒恩;莱昂·玛丽亚·雅各布斯·威廉默斯·斯文科尔斯 | 申请(专利权)人: | 未来诊断有限公司 |
主分类号: | G01N33/82 | 分类号: | G01N33/82 |
代理公司: | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人: | 李丙林;张英 |
地址: | 荷兰*** | 国省代码: | 荷兰;NL |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 游离 维生素 免疫 分析 | ||
1.一种用于分析存在游离的维生素D(包括维生素D代谢物如25-羟基-维生素D或1,25二羟基维生素D)的血液或血液成分的样品的方法,包括:
(a)将对于25-OH维生素D的固定的结合蛋白或抗体加入到所述样品中;
(b)将所述样品与稀释剂混合,所述稀释剂包括氟烷基表面活性剂;
(c)将所述样品孵育有效量的时间,以使得期望量的维生素D结合到所述结合蛋白上;
(d)通过洗涤去除未结合的血清和血清成分;
(e)利用标记的维生素D化合物使包括结合到其上的捕获的维生素D的固定的结合蛋白或抗体经受竞争性结合;
(f)确定结合到所述结合蛋白上的标记的维生素D化合物的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述氟烷基表面活性剂是全氟羧酸,优选选自由全氟辛酸、全氟庚酸、以及它们的混合物组成的组。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,所述表面活性剂的浓度为按重量计0.05%至0.5%,优选按重量计0.1%-0.25%。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述稀释剂是缓冲液,所述缓冲液具有在从6.0至8.0范围内的缓冲的pH。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述结合蛋白是抗体。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述结合蛋白是维生素D结合蛋白。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述样品是人类血清或血浆。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,以涂覆在磁性粒子上的形式提供所述结合蛋白。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述标记的维生素D化合物包括选自由放射性标记、荧光标记、发光标记、生物素标记、金标记、酶标记组成的组中的标记。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,参考对于游离的25-OH维生素D的校准浓度来确定所述浓度。
11.一种用于分析存在游离的维生素D的血液或血液成分的样品的方法,包括:在第一步骤中,在对于维生素D的固定的结合剂上捕获维生素D,和在随后的步骤中,使捕获的维生素D相对于标记的维生素D变体经受竞争性结合分析,其中通过如此有限地螯合一定量的结合的维生素D以便满足反复试验来实现游离的维生素D的捕获,其中使从其中捕获维生素D的样品经受捕获维生素D和使捕获的维生素D经受相同的竞争性结合分析的相同步骤,并且其中在两个竞争性结合分析之后测量的游离的维生素D的浓度基本上是相同的。
12.根据权利要求11所述的方法,根据权利要求1-10中任一项进行。
13.根据权利要求11或12所述的方法,其中,螯合的维生素D的分数是所述样品中存在的总的维生素D的0.1-10wt%,并且优选不超过它的5wt%。
14.一种用于从血清或血浆样品中对游离的维生素D定量的方法,包括根据权利要求1中限定的步骤(a)、(b)、(c)和(d),以及借助于质谱分析使捕获的维生素D经受定量分析。
15.一种用于确定血液或血液成分中的游离的维生素D的免疫分析,其中,所述分析利用根据前述权利要求中任一项所述的方法。
16.一种利用权利要求1-10中任一项所述的方法用于进行免疫分析的试剂盒,所述试剂盒包括固定在固相上的对于维生素D的结合蛋白、和标记的维生素D化合物。
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