[发明专利]游离的维生素D的免疫分析

权利要求书

1.一种用于分析存在游离的维生素D（包括维生素D代谢物如25-羟基-维生素D或1,25二羟基维生素D）的血液或血液成分的样品的方法，包括：

（a）将对于25-OH维生素D的固定的结合蛋白或抗体加入到所述样品中；

（b）将所述样品与稀释剂混合，所述稀释剂包括氟烷基表面活性剂；

（c）将所述样品孵育有效量的时间，以使得期望量的维生素D结合到所述结合蛋白上；

（d）通过洗涤去除未结合的血清和血清成分；

（e）利用标记的维生素D化合物使包括结合到其上的捕获的维生素D的固定的结合蛋白或抗体经受竞争性结合；

（f）确定结合到所述结合蛋白上的标记的维生素D化合物的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述氟烷基表面活性剂是全氟羧酸，优选选自由全氟辛酸、全氟庚酸、以及它们的混合物组成的组。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述表面活性剂的浓度为按重量计0.05%至0.5%，优选按重量计0.1%-0.25%。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述稀释剂是缓冲液，所述缓冲液具有在从6.0至8.0范围内的缓冲的pH。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述结合蛋白是抗体。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述结合蛋白是维生素D结合蛋白。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述样品是人类血清或血浆。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，以涂覆在磁性粒子上的形式提供所述结合蛋白。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述标记的维生素D化合物包括选自由放射性标记、荧光标记、发光标记、生物素标记、金标记、酶标记组成的组中的标记。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，参考对于游离的25-OH维生素D的校准浓度来确定所述浓度。

11.一种用于分析存在游离的维生素D的血液或血液成分的样品的方法，包括：在第一步骤中，在对于维生素D的固定的结合剂上捕获维生素D，和在随后的步骤中，使捕获的维生素D相对于标记的维生素D变体经受竞争性结合分析，其中通过如此有限地螯合一定量的结合的维生素D以便满足反复试验来实现游离的维生素D的捕获，其中使从其中捕获维生素D的样品经受捕获维生素D和使捕获的维生素D经受相同的竞争性结合分析的相同步骤，并且其中在两个竞争性结合分析之后测量的游离的维生素D的浓度基本上是相同的。

12.根据权利要求11所述的方法，根据权利要求1-10中任一项进行。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，螯合的维生素D的分数是所述样品中存在的总的维生素D的0.1-10wt%，并且优选不超过它的5wt%。

14.一种用于从血清或血浆样品中对游离的维生素D定量的方法，包括根据权利要求1中限定的步骤（a）、（b）、（c）和（d），以及借助于质谱分析使捕获的维生素D经受定量分析。

15.一种用于确定血液或血液成分中的游离的维生素D的免疫分析，其中，所述分析利用根据前述权利要求中任一项所述的方法。

16.一种利用权利要求1-10中任一项所述的方法用于进行免疫分析的试剂盒，所述试剂盒包括固定在固相上的对于维生素D的结合蛋白、和标记的维生素D化合物。