[发明专利]试剂盒和方法有效
申请号: | 201180024021.1 | 申请日: | 2011-05-13 |
公开(公告)号: | CN103038361B | 公开(公告)日: | 2017-02-08 |
发明(设计)人: | P·斯托尔汉德斯克;J·伦纳斯特兰德 | 申请(专利权)人: | 西森斯公司 |
主分类号: | C12Q1/48 | 分类号: | C12Q1/48;C12N9/12 |
代理公司: | 永新专利商标代理有限公司72002 | 代理人: | 左路,林晓红 |
地址: | 瑞典乌*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 试剂盒 方法 | ||
1.包含DNA依赖性DNA聚合酶和至少一种天然的脱氧核糖核苷的试剂盒。
2.包含DNA依赖性DNA聚合酶和检测系统的试剂盒,所述检测系统包含DNA模板分子、DNA引物分子和荧光部分,所述荧光部分能够从所述DNA依赖性聚合酶合成的dsDNA中被置换出或结合至所述DNA依赖性聚合酶合成的dsDNA。
3.权利要求1或2的试剂盒,还包含至少一种磷酸转移酶。
4.权利要求1至3中任一项的试剂盒,还包括至少一种天然的或修饰的脱氧核糖核苷。
5.权利要求1至4中任一项的试剂盒,其中所述至少一种天然的脱氧核糖核苷选自脱氧胸苷和/或脱氧胞苷或其混合物。
6.权利要求1至5中任一项的试剂盒,其中所述至少一种修饰的脱氧核糖核苷选自修饰的胸苷和修饰的胞苷,例如BrdU和/或IdU,或其混合物。
7.权利要求1至6中任一项的试剂盒,其中所述荧光部分偶联至单链DNA探针。
8.权利要求7的试剂盒,其中所述荧光部分和一猝灭部分偶联至单链DNA探针。
9.权利要求2至6中任一项的试剂盒,其中所述荧光部分是双链DNA表面结合或嵌入分子,例如PicoGreen、Eva染料或SYBR GreenI。
10.权利要求7或8的试剂盒,其中结合至所述单链DNA探针的荧光部分在所述探针处于其完整形式时是猝灭的。
11.权利要求9的试剂盒,其中所述DNA依赖性DNA聚合酶具有5'至3'核酸外切酶活性,例如Taq DNA聚合酶或Tth聚合酶。
12.权利要求7或8的试剂盒,其中结合至所述单链DNA探针的荧光部分当处于其完整形式并杂交至其靶模板时达到最大荧光。
13.用于测量样品中脱氧核糖核苷激酶活性的方法,其特征在于:
a.使样品在容器中与反应混合物接触,所述反应混合物包含DNA依赖性DNA聚合酶、至少一种脱氧核糖核苷和检测系统,所述检测系统包含DNA模板分子、DNA引物分子和荧光部分,所述荧光部分能够掺入所述DNA依赖性聚合酶合成的dsDNA、从所述DNA依赖性聚合酶合成的dsDNA中被置换出或结合至所述DNA依赖性聚合酶合成的dsDNA;
b.孵育所述容器;
c.测量来自所述荧光部分的信号;
d.使来自所述荧光部分的信号与所述样品中的脱氧核糖核苷激酶活性相关联。
14.权利要求13的方法,其中所述至少一种脱氧核糖核苷是天然的或修饰的脱氧核糖核苷或其混合物。
15.权利要求13或14中任一项的方法,其中所述至少一种天然脱氧核糖核苷选自脱氧胸苷和/或脱氧胞苷或其混合物。
16.权利要求13或14中任一项的方法,其中所述至少一种修饰的脱氧核糖核苷选自修饰的胸苷和修饰的胞苷,例如BrdU和/或IdU,或其混合物。
17.权利要求13至16中任一项的方法,其中所述荧光部分偶联至单链DNA探针。
18.权利要求13至17中任一项的方法,其中所述荧光部分和一猝灭部分偶联至单链DNA探针。
19.权利要求13至16中任一项的方法,其中所述荧光部分是双链DNA表面结合或嵌入分子,例如PicoGreen、Eva染料或SYBR Green I。
20.权利要求13至18中任一项的方法,其中结合至所述单链DNA探针的荧光部分在所述探针处于其完整形式时是猝灭的。
21.权利要求20的方法,其中所述DNA依赖性DNA聚合酶具有5'至3'核酸外切酶活性,例如Taq DNA聚合酶或Tth聚合酶。
22.权利要求17或18的方法,其中结合至所述单链DNA探针的荧光部分当处于其完整形式并杂交至其靶模板时达到最大荧光。
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