[发明专利]制备鲨烯的改良方法

说明书

本申请要求美国临时申请61/395,448（2010年5月12日提交）的优先权，其全部内容通过引用纳入本文以用于所有目的。

技术领域

本发明处于制造具有适于药学应用纯度的鲨烯的领域。

技术背景

鲨鱼肝油含有称为鲨烯的支链不饱和萜类化合物(C₃₀H₅₀；[(CH₃)₂C[＝CHCH₂CH₂C(CH₃)]₂=CHCH₂-]₂；2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳己烯；CAS RN 7683-64-9)。已知鲨烯用于人类疫苗中的水包油乳液，例如用于佐剂化流感病毒疫苗的MF59乳液。鲨烯还用于其他药物制品（如油膏、栓剂）和化妆品。

目前鲨烯的来源主要是鱼油，尤其是鲨鱼肝油。使用提取自鲨鱼肝油的鲨烯可产生相关问题，尤其是不能维持严格的制造标准时（如诺华公司（Novartis）生产MF59期间所用的那些）。例如，鲨鱼可被对人也有感染性的病原体感染，或产生对人有害的物质，且可能存在TSE或TSE样鲨鱼制剂[如参考文献1-3]。此外，鲨鱼可含有人类毒素如真鲨毒素（carchatoxin）。另外，鲨鱼可含有人类对之过敏的蛋白。人类过敏的常见鱼蛋白是在鲨鱼中发现的小清蛋白。因此鲨烯的廉价低级别来源不适于人类药学应用。在鲨烯是部分免疫佐剂的情况中，其对人受体伤害的风险增加，这是由于根据定义，所述佐剂可诱导针对杂质的强烈不利免疫应答。

找到制备适于药学应用的鲨烯的其他和改良过程是有用的，即所述鲨烯是满足调节标准且不含可伤害人类的污染物、病原体、病毒、人毒素或蛋白的产品。本发明过程特定用于纯化源自鲨鱼肝油的鲨烯。

发明内容

本发明提供从动物源含鲨烯组合物中制备鲨烯的方法，所述方法包括步骤：(a)在温度T₁进行纯化蒸馏;(b)在温度T₂进行变性蒸馏;其中步骤(a)和(b)可以任一顺序进行;T₁和T₂足以使鲨烯沸腾;T₂>T₁;且T₂≥200°C。所述动物来源通常是鱼类来源，如鲨鱼肝油（或其提取物），即本发明提供从鲨鱼肝油或从鲨鱼肝油提取物中制备鲨烯的方法。

本发明还提供从含鲨烯组合物中制备鲨烯的方法，所述方法包括步骤(a)在温度T₁进行纯化蒸馏;(b)在温度T₂进行变性蒸馏;其中步骤(a)和(b)可以任一顺序进行;T₁和T₂足以使鲨烯沸腾;T₁<140°C;且T₂>200°C。有用的所述含鲨烯组合物可为鲨鱼肝油或其提取物。

本发明还提供重蒸馏含至少99%鲨烯的组合物的方法，所述重蒸馏是在T₂的温度下进行的变性蒸馏；其中T₂≥200。该重蒸馏可将组合物中的含水量降低到如<0.01%。

本发明的方法可用于生产适于药学应用的产品。具体地，本发明方法可用于生产纯化的鲨烯，其不含可伤害人类的污染物、病原体、病毒、人类毒素或蛋白，尤其是蛋白小清蛋白。

本发明还提供制造水包油乳液的方法，包括用上述方法准备的鲨烯制备乳液。

本发明还提供制备疫苗组合物的方法，包括如上所述制备乳液，并将所述乳液与抗原混合。

本发明还提供制备疫苗药盒的方法，包括如上所述制备乳液并将乳液与抗原组分一起包装到药盒中作为药盒组分。

本发明还提供根据本发明方法制备的鲨烯。

本发明还提供含本发明所述方法制备的鲨烯的水包油乳液。

本发明还提供含本发明所述方法制备的鲨烯的疫苗。

本发明还提供本发明方法所述制备的鲨烯在疫苗中的应用。

纯化蒸馏

含鲨烯组合物可源自任何来源，如黑液皂化物撇渣;妥尔油皂;粗制妥尔油;妥尔油树脂;甘蔗油;油和脂肪的提取、脱胶和精炼的残余物;脂肪酸和酯类的蒸馏残余物;植物油的脱臭馏出物;橄榄油;大豆油;米糠油;鲨鱼肝油;牛脂;.咖啡油;鱼油;鳕鱼肝油;麦胚芽油;玉米胚芽油;棕榈油;酸渣树油（andiroba oil）;和番茄残余物的油。具体地，含鲨烯的化合物可源自鲨鱼肝油。