[发明专利]可活化构建体

说明书

发明领域

本发明涉及一种构建体、编码所述构建体的多核苷酸、表达所述构建体的细胞、所述构建体在治疗与血管破裂相关的并存病中的用途以及治疗凝血病、炎症和癌细胞转移的方法。

发明背景

血小板来源于其在骨髓中的细胞前体巨核细胞。当内皮完整时正常的静息血小板在血液循环各处自由流动。当单层内皮屏障受损时，静息的血小板通过糖蛋白(GP)受体黏附于内皮下结构。例如，GPIaIIa和GPVI结合胶原；GPIcIIa结合纤连蛋白；GPIc*IIa结合层粘连蛋白而GPIb-V-IX结合von Willebrand因子(vWF)聚合体。血小板以该方式的黏附导致其改变形状并释放其α颗粒和致密颗粒。反过来，这导致过多其它糖蛋白血小板受体例如GPIIbIIIa (其结合纤维蛋白原/纤维蛋白)、TLT-1和CREB-2的暴露；以及以下因子的释放：凝血因子I (纤维蛋白原)、V和XI；其它前凝血剂例如ADP、Ca²⁺和血清素；抗凝血剂例如组织因子通道抑制剂(TFPI)和对血小板补充和愈合必需的化合物例如血小板衍生生长因子(PDGF)。活化的血小板以快速反应彼此结合并交联纤维蛋白。活化的血小板还通过在其(细胞)膜上展示的选择蛋白而在白细胞归巢至血管损伤和炎症的部位中发挥重要作用。

组织因子(TF)(一种跨膜糖蛋白)，是血液凝固的主要细胞引发物。其主要在内皮下细胞例如平滑肌细胞和成纤维细胞的表面上表达，并且当内皮的完整性被打断时例如当血管被切断时结合凝血因子VII (FVII)和凝血因子VIIa (FVIIa)两者。当TF结合FVII时，其促进FVII向FVIIa活化。TF还极大提高了因子VIIa对其生理学底物因子IX和因子X的蛋白水解活性。其通过提供用于最佳大分子外部位(exosite)的相互作用的支架并通过诱导因子VIIa的蛋白酶结构域的构象改变来如此进行，该构象改变导致活性位点区域的正确限定。因此，TF是传统上被称作血液凝固的外部途径的起始复合体中FVIIa的辅因子。凝血级联的后续步骤最终导致纤维蛋白聚合体的形成，该聚合体被活化的血小板结合并与FXIIIa交联。

因此，活化的血小板和凝血级联的纤维蛋白聚合体产物一同形成稳定的血块并促进组织愈合。

在凝血病的受试者中，例如在患有A型血友病和B型血友病的人中，凝血级联的许多步骤由于例如凝血因子的缺乏或存量不足而使得功能障碍。凝血的一部分的此类功能障碍导致血液凝固不足和潜在地危及生命的出血。

本发明的一个目标是提供在此类受试者中适用作促凝血药物的构建体。本发明的第二个目标是提供在血液凝固起始的所需物理点活化的构建体。本发明的第三个目标是提供在生理学上合适的微环境中上调血液凝固的构建体。本发明的另一个目标为将单克隆抗体或其生物学上有活性的片段或变体引导至活化的血小板或内皮细胞的表面。因此，所述目标是能够在位于血管内或血管外的活化血小板的表面上引发血液凝固。这与正常和专有地内皮下典型地血管外血液凝固的引发相反。

已知涉及止血的一些过程/分子与组织愈合复杂交织，并因此还与病理过程例如炎症和癌细胞转移复杂交织。因此本发明的一个目标是提供一种构建体，其亦可用于治疗与出血患者中血管破裂相关产生的并存病特别是炎性疾病以及自身免疫性疾病和癌细胞转移。

发明简述

本发明涉及一种构建体，其包含(i)配体例如单克隆抗体(mAB)或其片段、(ii)可切割基序(CM)和(iii)包含(i)的表位基序(EM)的多肽序列。所述构建体还可包含组织因子(TF)或其生物学上有功能的变体或片段。所述构建体的所述mAB可能能够结合细胞上的受体，所述细胞选自活化的血小板、活化的内皮细胞和白细胞。在一个方面，所述mAB能够结合活化的血小板上的受体。该受体可为选择蛋白，例如E-选择蛋白(CD62E)、P-选择蛋白(CD62P)或L-选择蛋白(CD62L)。在一个实施方案中，所述受体为P-选择蛋白(CD62P)。

可工程改造所述构建体，使得所述CM的C端与所述单克隆抗体或其片段的重链的N端共价连接。可工程改造所述构建体，使得所述可切割基序的C端与所述单克隆抗体或其片段的轻链的N端共价连接。所述表位基序的C端可与所述可切割基序的N端共价连接。