[发明专利]使用HPPD抑制剂作为选择剂的大豆转化

权利要求书

1.一种使用农杆菌介导过程和一个或多个HPPD抑制剂耐受基因作为选择标记来转化大豆植物细胞的方法，所述方法包括步骤：

a）制备至少包括能被农杆菌菌株转化的植物细胞的大豆器官性外植体，

b）将至少包括所述外植体中所述植物细胞的区域接触至少包含HPPD抑制剂耐受基因的至少第一遗传构建体的农杆菌菌株，

c）存在HPPD抑制剂作为选择剂的条件下培养所述外植体，

d）可选地选择转化植物细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大豆植物细胞来自有子叶的外植体，半粒种子外植体或半胚胎种子外植体。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其特征在于，所述农杆菌菌株是根癌农根菌或毛根农杆菌。

4.一种如权利要求1-3中任一项所述转化大豆植物细胞的方法，所述方法特征在于所述农杆菌载体还包括至少第二异源遗传构建体，所述构建体与包括至少一个HPPD抑制剂耐受基因的所述第一异源遗传构建体共同引入所述大豆植物细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述不同异源遗传构建体包括在一个或多个T-DNA中。

6.如权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述异源遗传构建体包含赋予除草剂耐受性、线虫抗性、昆虫抗性的基因。

7.一种制备转基因大豆植物的方法，所述植物包含至少一种整合到其基因组的异源基因，所述方法包括权利要求1-6中任一项所述的方法，由下列步骤补充：

e）由所述转化细胞或转化组织再生成含有所述异源基因的植株和种子。

8.一种使用农杆菌介导过程和一个或多个HPPD抑制剂耐受基因作为选择标记基因来制备转基因大豆植物的方法，所述方法包括步骤：

a）制备至少包括能被农杆菌菌株转化的植物细胞的大豆器官性外植体，

b）将至少包括所述外植体中所述植物细胞的区域接触至少包含HPPD抑制剂耐受基因的异源DNA的农杆菌菌株，

c）存在HPPD抑制剂作为选择试剂的条件下培养所述外植体，

d）由所述外植体细胞再生成植株，

e）选择转化植物。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述HPPD抑制剂选自：

-异恶唑，特定是异恶唑草酮；

-二酮基腈，特定是2-氰基-3-环丙基-1-(2-CH3SO2-4-CF3苯基)-丙烷-1,3-二酮和2-氰基-3-环丙基-1-(2-CH3SO2-4-2,3-Cl2苯基)-丙烷-1,3-二酮（2-cyano-3-cyclopropyl-1-(2-CH3SO2-4-2,3-Cl2phenyl)propan-1,3-fione）；

-三酮，特定是磺草酮，硝磺酮，环磺酮，双环磺草酮，双环吡喃酮，苯并双环酮；和

-苄草唑，特定是苯吡唑草酮，磺酰草吡唑或盐酸苯偶氮吡胺。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述大豆植物细胞或植株还同时或先后用能够在该植物中过量表达PDH（预苯酸盐脱氢酶）酶的基因同时或连续转化。

11.如权利要求4-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述HPPD抑制剂耐受的选择标记基因通过将包含至少第二异源遗传构建体和选择标记基因的转化植株与同种植物的未转化株杂交来除去。

12.一种适于通过权利要求1-6和9-11中任一项所述方法得到的转基因大豆植物细胞。

13.使用一个或多个赋予HPPD抑制剂耐受性的基因作为选择标记基因以通过农杆菌介导方法转化大豆器官性细胞或组织。