[发明专利]诊断强直性脊柱炎的引物及用其诊断强直性脊柱炎的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于诊断强直性脊柱炎的引物，以及使用所述引物诊断强直性脊柱炎的方法。

背景技术

强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）作为一类重度进行性脊锥关节病（severely progressed Spondyloarthropathy，SpA），它是一种慢性进行的系统性疾病，其特征在于，它始发于少年晚期（late teenager）至二十几岁早期（early twenties），并在年龄达到三十几岁到四十几岁时显示出诸如典型的脊椎关节强硬、骶髂关节和脊柱（spine）产生慢性炎症反应、侵入到外周关节、眼、心脏或肠内等症状。

SpA的患病率根据各国情况而不同，但通常为1-2%。SpA限制了患者的活动，同时导致了对社会和经济的负面影响。近期，根据有关SpA的进程和治疗的新知识的积累，有报道指出早期治疗对治疗和抑制SpA的进程是有效的，早期诊断因而成为一个重要问题。

虽然尚未明确揭示SpA的病因，但有这样的假设：遗传异常、传染病和/或免疫炎症反应可能导致系统性风湿病之类的疾病，例如类风湿性关节炎或系统性红斑狼疮。一般来说，认为组织相容性抗原“HLA-B27”基因与上述疾病的发作有关。此外，近期的研究提出ERAP1（内质网氨肽酶1）和IL23R（白细胞介素23受体）基因与这些疾病具有联系。因强制性脊柱炎导致的腰部和骶骨部疼痛发作较慢，而且在一些病例中还伴随着膝部和踝部关节炎。因为症状不明确，加上症状会反复恶化和改善，因此很难将其与普通的背痛或非特异性的关节炎疼痛区别开来。根据欧洲的研究，从SpA症状的发作到AS的确诊要耗费大约10年的时间。这样一来，当患者就医时，常常对该疾病的治疗已为时过晚。

对AS的经典诊断是在患者的症状、病史以及骶骨关节和脊柱的放射学结果的基础上进行的。更为甚者，仅当疾病进行到足够程度时才能在放射学结果中显示异常，故早期不可能通过放射学结果来作出诊断。最近MRI（磁共振成像）扫描用于早期诊断中。但由于这一测试方法昂贵而且耗时而在使用上受到了限制。血液中“HLA-B27”基因测试也被用于早期诊断中，但它对15%的患者给出了阴性结果而对众多正常患者却给出了假阳性的结果。此外，HLA-B27没有提供任何有关预后和追踪所述疾病进行程度的信息。

此外，较多的炎症标记物（例如ESR（红细胞沉降率）或CRP（C反应蛋白））不能反映AS活性，虽然这些标记物通常被用作许多风湿性疾病的疾病活性指数。因此，依然通过患者的主观阐释来对AS的治疗和进展的反应进行评估。同时，在类风湿性关节炎患者中发现的类风湿因子或抗环瓜氨酸肽抗体被用作预后指数。换而言之，正指数表示发作且快速进行的关节炎，由此需要对具有正指数的患者进行早期积极治疗。但还没有针对AS的预后指数。

总而言之，除了用途有限的HLA-B27之外，还没有能用于对AS进行早期诊断的生物标记，此外，也没有反映AS预后的生物标记或者追踪AS进行程度的活性指数。因此，对用于AS早期诊断、预后和/或追踪其进行程度的生物标记的探索发现工作是庞大的。

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种对AS进行早期诊断的方法。更具体来说，本发明提供了用来用于诊断AS的引物组、试剂盒和生物标记。

技术方案

本发明的一方面提供了用于诊断AS的引物组。在本发明的一种实施方式中提供了含有以下的引物组：（a）与SEQ ID NO：7具有至少95%的序列同源性的正向引物和（b）至少一个选自由SEQ ID NO：9-13的引物所组成的组中的反向引物。

在本发明的另一种实施方式中，提供了含有以下的引物组：（a）至少一个选自由具有SEQ ID NO：15-17的引物所组成的组中的正向引物和（b）与SEQ ID NO：19具有至少95%的序列同源性的反向引物。

在本发明名的再一实施方式中，提供含有以下的引物组：（a）与SEQID NO：18具有至少95%的序列同源性的正向引物和（b）与SEQ ID NO：20具有至少95%的序列同源性的反向引物。

本发明的另一方面提供了一种使用上述引物组来诊断强直性脊柱炎的方法。在本发明的一种实施方式中，所述方法可以包括以下步骤：（a）用患者的生物样品来合成cDNA（互补脱氧核糖核酸）；和（b）使用上述合成的cDNA和与本发明任一引物组具有至少80%的序列同源性的引物组进行PCR（聚合酶链式反应）；和（c）测定PCR产物的核酸序列。