[发明专利]在淡水蚌肉汁水中提取酸性粘多糖和透明质酸钠的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及以动物组织提取大分子透明质酸钠(HA)和酸性粘多糖的生物技术领域，更具体的说明涉及一种在淡水蚌肉汁水中提取酸性粘多糖和透明质酸钠的工艺方法。

背景技术：

透明质酸钠(HA)又名玻璃酸、玻尿酸。是酸性粘多糖中的一种，透明质酸钠以其独特的分子结构广泛应用在心血管外科，关节炎，外科手术防粘剂、药物选送、癌症治疗、眼科、整形美容外科及美容保养等领域。目前透明质酸产品生产分提取法和微生物发酵法两种，提取法生产透明质酸钠以雄鸡鸡冠和人脐带作为提取原材料，该两种原材料受来源限制故产量稀少，价格昂贵，远远不能满足市场需求。传统氯仿法提取工艺过程操作复杂，且氯仿对环境不友好，若提供一种资源丰富、安全可靠，原料成本低廉的农副产品作为透明质酸钠的提取原材料和提取工艺，则大大降低了透明质酸钠的生产成本，提高了透明质酸钠产量，为水乡地区的农户也增加了经济收入来源。

发明内容:

本发明的目的是提供一种在淡水蚌肉汁水中提取酸性粘多糖和透明质酸钠的工艺方法。本发明采用淡水河蚌肉作提取原料不受来源限制，利废为宝，大大降低了生产成本和提高了国内天然透明质酸钠的产量，提取工艺操作简便，分离效率高，无相变。

为实现本发明的目的采用的技术解决措施如下：

在淡水蚌肉汁水中提取酸性粘多糖和透明质酸钠的方法，包括以下工艺步骤：

①将淡水蚌肉用胶体磨磨成糊状，加入与淡水蚌肉等重量的去离子水中，搅拌加热至70℃～80℃，保温30min，冷却至40℃～45℃，加入3‰淡水蚌肉重量的胰蛋白酶，在40℃～45℃保温酶解20～24h，得到解离液；

②将解离液经石英砂过滤罐过滤，再用精密过滤器抽滤得到澄清的酶解液；

③在酶解液中加入1％淡水蚌肉重量的氯化十六烷基吡啶，搅拌10min，静置过夜，收集络合沉淀物；

④将络合沉淀物加入其重量2倍量的0.5～0.8moL/L氯化钠溶液中搅拌解离，然后用离心机离心处理，除去沉淀收集解离液；

⑤将步骤④中得到的解离液搅拌加入解离液3倍体积的95％质量浓度的乙醇，静置8小时，虹吸除去上层乙醇液(供回收乙醇)，收集下层沉淀吊滤至无乙醇液渗出；

⑥将吊滤的沉淀物用无水乙醇洗涤1-2次，再次吊滤至干，放在真空干燥箱中至完全干燥，得到粘多糖含量90％以上，透明质酸钠含量35％以上的透明质酸钠中间品；

⑦将透明质酸钠中间品溶于透明质酸钠中间品重量4倍量的浓度为0.1mol/L的氯化钠溶液中，分别通过分子量为100000、6000、3000级超滤膜错流过滤，截流得滤液；

⑧将滤液按第⑤-第⑥的步骤，重新处理一次，得到相对分子量100-240万，透明质酸钠含量90％以上的透明质酸钠成品。

本发明有益效果在于：

①本发明提取的透明质酸钠产品其特性粘度大大高于微生物发酵取得的透明质酸钠产品，更接近于人体所需透明质酸钠，在医药产品中应用安全可靠。

②本发明在分级提取中所得的酸性粘多糖产品其活性成份存在种类为透明质酸、硫酸类肝素、硫酸软骨素、硫酸角质素、和硫酸皮肤素等，具有抗肿瘤、抗凝血、抗应激、抗氧化、抗辐射等多种功能，可广泛用于医药、美容保养和保健食品领域，提高了产品生产附加值。

③本发明所采用的原材料在我国水乡地区资源丰富，如淡水育珠蚌肉大多作为废弃物没有合理开发利用，故原材料来源广泛，，价格低廉，安全可靠，可代替以鸡冠、人脐带作为原材料提取的HA，大大提高天然HA的生产量，取之易得，且能利废为宝，为当地淡水育珠农户解决蚌肉利用难题，增加农户经济收入，创造较大的社会经济效益。

④本发明所采用的提取工艺降低了对透明质酸钠的降解破坏，保持了透明质酸钠的大分子特性，更接近人体所需HA，在分级提取中可得到含量90％以上的酸性粘多糖和葡萄糖醛酸含量43％以上的透明质酸钠成品这两级产品。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明所要求保护的范围并不局限于实施例所描述的范围。

实施例1，在淡水蚌肉汁水中提取酸性粘多糖和透明质酸钠的方法，包括以下工艺步骤：

①将淡水蚌肉用胶体磨磨成糊状，加等量去离子水，搅拌加热至80℃，保温30min，冷却至45℃，加入3‰胰蛋白酶，在45℃保温酶解24h，得到解离液；

②将解离液经石英砂过滤罐过滤，再用精密过滤器抽滤得到澄清的酶解液；