[发明专利]SecB介导的翻译后靶向途径的功能构建及其应用

权利要求书

1.一种在细菌中构建SecB介导的翻译后靶向途径的方法，其特征在于，该方法包括：

在该细菌中共表达嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，从而在该宿主中构建SecB介导的翻译后靶向途径；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“锌结合基序”与该蛋白的其它部分的序列异源，且所述嵌合SecA蛋白能结合所述SecB蛋白。

2.一种增加细菌分泌蛋白效率的方法，其特征在于，该方法包括：

在该细菌中共表达嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，从而在该宿主中构建SecB介导的翻译后靶向途径，由此增加该细菌分泌蛋白的效率；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“锌结合基序”与该蛋白的其它部分的序列异源，且所述嵌合SecA蛋白能结合所述SecB蛋白。

3.一种提高细菌蛋白质分泌能力的方法，其特征在于，该方法包括：

在该细菌中共表达嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，从而在该宿主中构建SecB介导的翻译后靶向途径，由此提高该细菌的蛋白质分泌能力；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“锌结合基序”与该蛋白的其它部分的序列异源，且所述嵌合SecA蛋白能结合所述SecB蛋白。

4.如权利要求2～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述蛋白选自天然分泌蛋白或人工分泌蛋白，其中天然分泌蛋白优选为外源的天然分泌蛋白。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述外源的天然分泌蛋白选自水解酶或医药用蛋白，优选为蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、抗体、干扰素、生长因子。

6.如权利要求4～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述蛋白为融合蛋白，优选为与麦芽糖结合蛋白融合而形成的融合蛋白。

7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，所述细菌为天然缺失secB基因的细菌，且所述细菌天然存在secA基因。

8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征在于，所述细菌为选自芽胞杆菌属(Bacillus)、棒杆菌属(Corynebacterium)、分支杆菌属(Mycobacterium)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)或梭菌属(Clostridium)的细菌。

9.如权利要求1～8中任一项所述的方法，其特征在于，所述细菌选自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)、短芽胞杆菌(Bacillus brevis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)或苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其特征在于，所述在该细菌中共表达嵌合SecA蛋白和SecB蛋白包括：

构建含嵌合secA基因的表达载体和含secB基因的表达载体，其中，所述嵌合secA基因为人工改造所述细菌secA基因而得，即所述细菌secA基因“锌结合基序”的编码序列被外源secA基因“锌结合基序”的编码序列所替换，从而具备结合所述SecB蛋白的能力；

用所述含嵌合secA基因的表达载体和含secB基因的表达载体转化该细菌，从而在该细菌中共表达嵌合SecA蛋白和SecB蛋白。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述secB基因来自于与所述细菌不同种属的细菌。

12.如权利要求10～11中任一项所述的方法，其特征在于，所述secB基因与所述secA基因的“锌结合基序”的编码序列来源于相同种属的细菌。

13.如权利要求10～12中任一项所述的方法，其特征在于，所述的外源secA基因的“锌结合基序”为外源SecA蛋白羧基末端最后18～60个氨基酸。

14.如权利要求10～13中任一项所述的方法，其特征在于，所述外源secA基因为大肠杆菌secA基因或流感嗜血杆菌secA基因。