[发明专利]一种酯酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种酯酶Est_p6^-，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.编码权利1所述酯酶的基因。

3.含有权利要求2所述基因的载体。

4.如权利要求3所述的载体，其特征在于，其为pET28a-est_p6^-。

5.如权利要求4所述的表达载体，其构建方法如下：

(1)以宏基因组文库中含有est_p6基因插入片段的质粒为模板，PCR扩增出去掉信号肽的酯酶基因est_p6^-；

(2)将步骤(1)的扩增产物经测序验证后，与pET28a载体重组，得到重组大肠杆菌表达载体pET28a-est_p6^-。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，步骤(1)中的PCR扩增引物核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

7.含有权利要求3～6任意一项所述表达载体的宿主细胞。

8.权利要求1所述酯酶在脂类降解及其他油脂类化合物的生物转化中的应用。

9.权利要求1所述酯酶在催化解酯、酯交换或酯合成中的应用。

10.一种表达酯酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)活化：取宿主的单菌落于5ml含卡那霉素50μg/ml的LB培养基中，于37℃、200～250rpm培养至OD₆₀₀≈0.5；

2)培养：以0.8～1.0％接种量将菌液转接到500ml含kan 50μg/ml的LB培养基中，于37℃、200～250rpm培养至OD₆₀₀≈0.5；

3)诱导：向菌液中添加IPTG至终浓度为0.5mM，于21℃、200～250rpm诱导培养12～14小时；

4)收集细胞：4℃、10000g离心10～15分钟收集细胞；弃上清，每100ml菌液用60ml 50mM的Tris-HCl缓冲液重悬细胞，洗涤两遍；细胞重悬浮于30～40ml 50mM的Tris-HCl缓冲液中；

5)获取粗酶提取液：冰浴条件下，超声波破碎细胞；细胞破壁后，以4℃、10000～15000g离心10～15分钟，收集上清即粗酶提取液。