[发明专利]信号放大型免疫荧光探针及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201110456124.7 | 申请日： | 2011-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN102565383A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 吴坚;陈春香 | 申请（专利权）人： | 吴坚 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310012 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 信号 大型 免疫 荧光 探针 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种信号放大型免疫荧光探针的制备方法，包括：
(1)在缩合剂的存在下，将对苯二胺和均苯三甲酸加入有机溶剂中，于80-100℃缩合反应3-5h，得到多羧基大分子；
(2)将步骤(1)得到的多羧基大分子加入含有1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的溶液中进行活化；然后加入抗体，反应0.5-2h；再加入聚赖氨酸，继续反应0.5-2h，得到表面连接有抗体和聚赖氨酸的多羧基大分子；
(3)用荧光标记物对步骤(2)制得的表面连接有抗体和聚赖氨酸的多羧基大分子进行标记，制得信号放大型免疫荧光探针。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的缩合剂为三苯基亚磷酸盐与吡啶的混合物；所述的有机溶剂为N-甲基-2-吡咯烷酮。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对苯二胺与均苯三甲酸的摩尔比为1∶0.8-1∶1.2。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述步骤(1)得到的多羧基大分子、抗体和聚赖氨酸的摩尔比为1∶2∶20-1∶3∶50。
5.一种信号放大型免疫荧光探针的制备方法，包括：
(1)将抗体加入生物素溶液中，搅拌反应1-2h，然后加入荧光标记物进行标记，制得荧光标记的抗体-生物素复合物；
(2)将聚赖氨酸加入生物素溶液中，搅拌反应1-2h，然后加入荧光标记物进行标记，制得荧光标记的聚赖氨酸-生物素复合物；
(3)将步骤(1)制得的荧光标记的抗体-生物素复合物与链霉亲和素溶液混合，反应0.5-1h；然后加入步骤(2)制得的荧光标记的聚赖氨酸-生物素复合物，继续反应0.5-1h，制得信号放大型免疫荧光探针。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗体与生物素的摩尔比为1∶2-1∶4。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述聚赖氨酸与生物素的摩尔比为1∶1-1∶2。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述荧光标记的抗体-生物素复合物、链霉亲和素与荧光标记的聚赖氨酸-生物素复合物的摩尔比为1∶3∶10-1∶5∶15。
9.一种采用如权利要求1-8任一所述的制备方法制得的信号放大型免疫荧光探针。
10.如权利要求9所述的信号放大型免疫荧光探针在荧光免疫检测中的应用。
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