[发明专利]靶向小胶质细胞的基因-载体复合物及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201110454805.X | 申请日： | 2011-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN102533855A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 刘勇;杨曌;罗海鸥 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A61K48/00;A61P25/00 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400037 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 胶质 细胞 基因 载体 复合物 及其 制备 方法 应用 | ||
1.靶向小胶质细胞的基因-载体复合物，其特征在于，由CX3CR1 shRNA干扰载体与基因载体通过静电作用结合而成，所述基因载体为H9多肽与壳聚糖的偶联物。
2.根据权利要求1所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物，其特征在于，所述CX3CR1 shRNA干扰载体中含有正义链如SEQ ID No.2所示、反义链如SEQ ID No.3所示的shRNA序列。
3.根据权利要求1所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物，其特征在于，所述CX3CR1 shRNA干扰载体是以pSilencer 2.1-U6neo载体为基础载体。
4.根据权利要求1所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物，其特征在于，所述H9多肽与壳聚糖的偶联物是通过1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺将H9多肽的羧基与壳聚糖的氨基进行偶联。
5.权利要求1所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物的制备方法，其特征在于，在涡旋条件下，向CX3CR1 shRNA干扰载体的磷酸盐缓冲溶液中滴入基因载体溶液，滴加完毕后继续涡旋20~60分钟，再静置20~60分钟，即得靶向小胶质细胞的基因-载体复合物。
6.根据权利要求5所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物的制备方法，其特征在于，所述CX3CR1 shRNA干扰载体和基因载体的质量比为1:2。
7.根据权利要求5所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物的制备方法，其特征在于，所述CX3CR1 shRNA干扰载体的制备方法是先将正义链如SEQ ID No.2所示、反义链如SEQ ID No.3所示的1对shRNA单链寡核苷酸片段退火形成shRNA双链寡核苷酸片段，再将所得shRNA双链寡核苷酸片段与经BamH I和Hind III双酶切处理的pSilencer 2.1-U6neo载体进行连接，即得CX3CR1 shRNA干扰载体。
8.根据权利要求5所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物的制备方法，其特征在于，所述基因载体的制备方法是将壳聚糖溶于pH5的四甲基乙二胺缓冲液中，加入1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌均匀，再加入H9多肽，室温搅拌反应8~16小时，透析，干燥，制得H9多肽与壳聚糖的偶联物即基因载体。
9.权利要求1所述的靶向小胶质细胞的基因-载体复合物在制备小胶质细胞活化抑制剂中的应用。
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