[发明专利]高纯度白鲜碱单体的制备方法

说明书

技术领域

    本发明涉及中药有效成分的分离纯化方法，具体为从中药白鲜皮中分离制备高纯度白鲜碱单体的方法。

技术背景

白鲜皮为芸香科植物白鲜（Dictamus dasycarpus Turcz.）的根皮，具有清热燥湿、祛风解毒等功效，可用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹、风疹、皮肤搔痒、疥癣、黄疽和急慢性肝炎等疾病。白鲜碱（Dictamnine）为白鲜皮的主要化学成分，具有强心、收缩平滑肌、松弛血管、抗真菌、DNA 光毒性、抗血小板聚集、昆虫拒食等作用，并且是一种潜在的保鲜剂。

目前国内尚未有对白鲜碱单体进行分离的专利，现有关于白鲜碱单体分离制备的文献方法主要采用反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱色谱，其局限性是费时费力、污染环境、样品纯度低，而且反复柱层析对样品有不可逆性吸附作用，分离得到白鲜碱单体制备效率低、成本较高，难以发展成为制备量大的分离技术。

高速逆流色谱（High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC ）是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容

本发明的目的是将柱色谱层析和高速逆流色谱法有机的结合在一起，充分发挥它们各自的优势，开发出一种制备成本低于现有技术，操作简便，效率高，可以较大批量从中药白鲜皮中，分离制备出纯度大于99％白鲜碱单体的分离制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案来实现：一种高纯度白鲜碱单体的制备方法，它包括以下步骤：

（1）采用有机溶剂对白鲜皮进行提取，将提取液真空浓缩成浸膏，得总提取物；

（2）将所得总提取物用柱色谱单次层析，进行初步纯化，收集含有白鲜碱的组分，合并，蒸干溶剂，得白鲜碱粗分物；

（3）采用高速逆流色谱法纯化白鲜碱粗分物，分离制得纯度高于99%的白鲜碱单体。

本方案的具体特点还有，步骤(1)中有机溶剂为石油醚或乙醚。

柱色谱层析采用的固定相为颗粒度为50～400目的硅胶，流动相由组分A和B组成的二元混合液，A组分为石油醚；B组分为乙酸乙酯；A与B的体积比为1～10：1。

步骤（3）中高速逆流色谱法采用的精制溶剂体系由E、F、C、D四个组分构成，E组分可选自石油醚或正己烷，F组分为乙酸乙酯或者乙酸丙酯，C组分为甲醇或者乙醇，D组分为水， E、F、C、D的体积比为1：0.5～2：0.5～3：0.5～2。

精制溶剂体系中正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=1：1：1.2：1。

具体而言，步骤如下：

1. 总粗提物的制备：白鲜皮药材粉碎后，用有机溶剂提取3次，过滤，滤液减压浓缩成浸膏。

2. 白鲜碱粗分物的获取：取提取所得浸膏，进行单次硅胶柱层析，流动相用不同比例的二元混合液，A组分为石油醚；B组分为乙酸乙酯。A与B的体积比为1～10：1。

3. 高速逆流色谱法纯化白鲜碱：将硅胶分离的白鲜碱粗分物进行高速逆流色谱法分离，溶剂体系由四个组分构成，E组分可选自石油醚、正己烷等醚类或烷烃类，F组分可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯等脂肪酯类，C组分可选自甲醇、乙醇等脂肪醇，D组分为水，优选正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，E、F、C、D的体积比为1：0.5～2：0.5～3：0.5～2。具体过程为：配制溶剂系统，充分摇匀后静置，待分层后，将上下相分开；用泵将溶剂系统的上相注入高速逆流色谱仪的分离柱；取溶剂系统的上相和下相溶解白鲜碱粗分物样品；开启逆流色谱仪，注入溶剂系统的下相进行平衡；溶剂系统达到流体动力学平衡后，注入样品溶液；用紫外检测器检测洗出液，根据所得的色谱图收集目标组分。

4. HPLC分析及HSCCC峰的鉴定：利用高效液相色谱（HPLC）分析提取物。高效液相色谱条件：岛津Shim pack VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm)，紫外检测波长236 nm，柱温：25℃，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL，流动相采用甲醇：水=60：40。