[发明专利]用于外源蛋白可溶性表达的质粒及其制备和应用方法

权利要求书

1.一种用于外源蛋白可溶性表达的表达载体，其特征在于，所述表达载体包含有分子伴侣FaeE的编码序列。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为原核细胞表达载体。

3.一种用于外源蛋白可溶性表达的大肠杆菌质粒，其特征在于，所述质粒包含有分子伴侣FaeE的编码序列。

4.根据权利要求3所述的质粒，其特征在于，所述的分子伴侣FaeE的编码序列的5’端添加了大肠杆菌核糖体结合位点。

5.根据权利要求3所述的质粒，其特征在于，所述质粒还含有T7启动子、lac操纵子、T7终止子，所述的分子伴侣FaeE的编码序列位于T7启动子和lac操纵子的调控下，并通过T7终止子进行终止。

6.根据权利要求5所述的质粒，其特征在于，所述质粒还含有由BamH I、EcoR I、Sac I、Hind III、Hot I、Xho I限制性内切酶识别位点组成的多克隆位点，位于所述的分子伴侣FaeE的编码序列和所述的T7终止子之间。

7.根据权利要求6所述的质粒，其特征在于，所述质粒还含有6个His-tag基因，位于所述的多克隆位点和所述的T7终止子之间。

8.根据权利要求3所述的质粒，其特征在于，所述质粒为pET30e，序列如Seq ID No.1所示。

9.根据权利要求3-7中任一权利要求所述的质粒，其特征在于，所述质粒还包括所述外源蛋白的编码序列，与所述的分子伴侣FaeE的编码序列位于同一个表达单元。

10.根据权利要求9所述的质粒，其特征在于，所述外源蛋白是霍乱毒素B亚基(CTB)。

11.根据权利要求9所述的质粒，其特征在于，所述外源蛋白是过氧化物酶前体(PRX)。

12.根据权利要求9所述的质粒的应用方法，其特征在于，所述方法包括：将所述的质粒分子转化大肠杆菌感受态细胞得到重组大肠杆菌菌落，经接种培养得到菌体细胞后实现可溶性表达的提高。

13.根据权利要求12所述的应用方法，其特征在于，所述的大肠杆菌感受态细胞是大肠杆菌BL21(DE3)。

14.根据权利要求13所述的应用方法，其特征在于，所述的转化方法是热激法。

15.一种制备用于外源蛋白可溶性表达的表达载体的方法，其特征在于，所述方法包括：将分子伴侣FaeE的编码序列克隆进所述表达载体中而获得所述的用于外源蛋白可溶性表达的表达载体。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述表达载体是原核细胞表达载体。

17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述表达载体是大肠杆菌质粒。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述的大肠杆菌质粒是表达载体pET30a。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，通过Nde I和BamH I两个限制性内切酶将所述的分子伴侣FaeE的编码序列克隆进所述的表达载体pET30a。

20.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：使所述的分子伴侣FaeE的编码序列位于T7启动子和lac操纵子的调控下。

21.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在将分子伴侣FaeE的编码序列克隆进大肠杆菌质粒前，在分子伴侣FaeE编码序列的5’端添加大肠杆菌核糖体结合位点。