[发明专利]一种葡聚糖凝胶层析法测定硫酸长春新碱脂质体包封率的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种硫酸长春新碱脂质体包封率测定方法，特别是涉及一种葡聚糖凝胶层析法测定硫酸长春新碱脂质体包封率的方法。

背景技术

长春新碱(Vincristine)是长春花碱类抗肿瘤药物，主要用于治疗急性淋巴细胞白血病、何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤等疾病。目前临床用药为硫酸长春新碱注射液，其抗肿瘤作用良好，但由于严重的神经毒性和组织刺激性等不良反应，使其临床应用受到限制。脂质体作为一种理想的药物载体，具有生物相容性、靶向性、缓释性、降低药物毒性等特点。大量研究表明，将硫酸长春新碱制备成脂质体，可以提高其治疗指数，降低或减少药物的不良反应。

包封率是评价脂质体质量的重要指标。赵妍等人(赵妍等，主动载药法制备硫酸长春新碱脂质体及其包封率的测定[J]，中国药学杂志，2005，40(20)：1559～1562)报道了采用pH梯度法制备硫酸长春新碱脂质体，以阳离子交换树脂分离脂质体和游离药物，用RP-HPLC法测定脂质体的包封率，作者同时指出葡聚糖凝胶G-50微型柱法无法完全分离脂质体和游离药物。

本发明人研究发现葡聚糖凝胶G-50层析柱法也存在脂质体与游离药物分离度差的问题，详细数据见对比实施例1～3。本发明的目的就是解决葡聚糖凝胶G-50层析柱法测定硫酸长春新碱包封率时存在的脂质体与游离药物分离度差的问题。

发明内容

本发明目的是提出一种葡聚糖凝胶层析法测定硫酸长春新碱脂质体包封率的方法，解决葡聚糖凝胶G-50层析柱法测定硫酸长春新碱包封率时存在的脂质体与游离药物分离度差的问题。

发明人通过试验研究发现，葡聚糖凝胶G-50的产地和凝胶球的粒径对脂质体和游离药物的分离度影响很大，粒径太大或太小都不利于分离。发明人通过试验考察与方法验证，产生了本发明的技术方案，具体方案如下：

一种葡聚糖凝胶层析法测定硫酸长春新碱脂质体包封率的方法，包括如下步骤：

(1)取适量葡聚糖凝胶G-50，加适量去离子水室温溶胀至少24小时。待充分溶胀后，大量去离子水洗涤，直至上层液澄清为止。将溶胀的葡聚糖凝胶G-50装入内径为1厘米，长度为30厘米的层析柱中，填装柱高20厘米。

(2)取硫酸长春新碱脂质体适量上样于葡聚糖凝胶层析柱顶端，以去离子水为洗脱介质进行洗脱，收集脂质体部分，加适量10％的Triton-X100溶液破膜，用水定量稀释，以HPLC法测定脂质体部分含硫酸长春新碱的量。

(3)取硫酸长春新碱脂质体适量，直接加适量10％的Triton-X100溶液破膜，用水定量稀释，以HPLC法测定脂质体含硫酸长春新碱的总量。

(4)脂质体部分含硫酸长春新碱的量与脂质体含硫酸长春新碱的总量的比值即为硫酸长春新碱脂质体的包封率。

所述的葡聚糖凝胶G-50为Pharmacia生产，其湿胶球的粒径规格为Medium，范围在100～300微米。

所述的HPLC法可以是本发明具体实施方式中的分析方法，也可以其他文献中公开的方法。

本发明解决了葡聚糖凝胶G-50层析柱分离脂质体和游离药物分离度差的问题。本发明的硫酸长春新碱包封率测定方法可使脂质体和游离药物分离完全，且游离药物洗脱完全，洗脱速度快，节省分析时间。该方法准确度高，重复性好，可用于硫酸长春新碱脂质体的处方工艺研究和质量控制。

附图说明

图1为实施例1载药脂质体的洗脱曲线；

图2为对比实施例1载药脂质体的洗脱曲线；

图3为对比实施例2载药脂质体的洗脱曲线；

图4为对比实施例3载药脂质体的洗脱曲线。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明作更具体的解释，但本发明并不仅仅局限于这些实施例，同样这些实施例也不以任何方式限制本发明。

采用高效液相色谱测定硫酸长春新碱的含量，色谱条件如下：

色谱柱：Diamonsil C₁₈(200mm×4.6mm×5μm)；流动相：甲醇-水-三乙胺(体积比70∶30∶0.5，用磷酸调pH值7.0)；紫外检测波长：297nm；柱温：40℃；流速：1.2mL·min^-1；进样量：20μL。

实施例1