[发明专利]一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1及其基因、分离纯化、化学合成和应用

说明书

技术领域

本发明提供一种来源于海南湍蛙(Amolops hainanensis)的广谱抗微生物肽Hainanenin-1及其基因、分离和化学合成方法和在生物制药领域的应用，属于生物医学技术领域。 

背景技术

随着抗生素的广泛、大量使用，病原微生物对抗生素所产生的耐药性亦逐渐提高，已成为感染性疾病治疗的难点，尤其近期出现“超级病菌”的威胁，均迫使人们去寻找新型的抗微生物制剂。近期的研究发现，多肽抗生素具有广谱的抗菌活性，同时具有“传统抗生素”无法比拟的优越性：如在最小作用浓度时，快速而广谱地杀灭微生物(包括目前临床抗药菌)；对真菌也有抑制作用；不会诱导抗药菌株的产生；对于局部感染和全身感染都有效，有希望成为新一代抗菌剂，其研制目前受到广泛重视。同时抗菌肽还具有分子量小，稳定性高、不易产生抗药性力等特点。抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽，抗菌肽广泛存在于细菌、植物和动物体中，是宿主免疫防御系统的一个重要组成部分。 

与传统的抗生素不同，两栖类皮肤抗菌肽是通过干扰原核细胞膜结构导致质膜通透性增大，从而引起抑菌或杀菌作用，病原体对其不易产生抗药性。两栖类抗菌肽除了具有高效、广谱且不易产生耐药性的抗菌活性外，还具有抗肿瘤，病毒，原虫等活性，且对人体正常细胞几乎无作用。因此，在耐抗生素病原菌株不断出现，病毒和肿瘤等疾病对类健康造成极具威胁的今天，抗菌肽将有望成为新一代的抗病原微生物及肿瘤的药物。据国内外文献报道，已从各种生物来源分离得到不同的活性多肽，而且有些已进入临床治疗。如从爪蟾(Xenopus laevis)皮肤分泌液获得的活性多肽Magainin具广谱抗微生物作用，同时具有抗肿瘤活性，在美国已获准作为广谱抗菌药物，其基因工程产品已进入三期临床；Intrabiotics公司生产的活性多肽IB-367已获准用于治疗癌症病人因多种细菌感染而引起的口腔溃疡一期临床试验；Applied Microbiology公司与Astra公司合作用活性多肽nisin治疗胃溃疡的临床试验也取得良好的疗效。 

我国拥有丰富的两栖类动物资源，它是中国生物资源的重要组成部分，其中很多物种具有食用或药用等价值，具有很大的开发利用潜力。两栖动物由于长期生活在潮湿、阴暗、微生物大量滋生的环境下，在长期自然进化过程中形成了三套防御机制：(1)物理屏障，粘液腺分泌大量糖蛋白和蛋白聚糖，包裹在皮肤外表面，阻碍病原菌的侵入；(2)获得性免疫系统，两栖动物皮肤中含有抗体IgG；(3)先天免疫系统，主要由大量的抗菌肽构成。目前，对两栖类中蛙类抗菌肽尤其是皮肤和肠道抗菌肽研究的最清楚。自Zasloff从水蛙皮肤中分离到 Magainins后，相继从不同的蛙类中分离到许多具有广谱的抑菌活性的抗菌肽家族(如Dermaseptins、Temporins、Ranatuerins、Brevinins、Tigerinins)，一些还具有独特的抗真菌活性。我国对两栖类药物的应用有悠久的历史，但对其活性成分和药理性质的研究主要集中于生物碱等有机小分子，对其皮肤活性肽类物质的研究还鲜有报道。海南湍蛙(Amolops hainanebsis)为蛙科湍蛙属的两栖动物，是中国的特有物种，分布于海南等地。 

本发明的海南湍蛙(Amolops hainanensis)环状抗菌肽Hainanenin-1分子量小，结构简单，仅含一个二硫键，方便化学合成及基因工程制备。相比较两栖动物来源的已报道的其他家族抗菌肽，Hainanenin-1抗微生物活性更强，且具有广谱的抗微生物活性，对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均有活性，其中包括大量临床分离耐药菌株，此外还具有溶血性低有益特点，均使Hainanenin-1成为外用抗菌药物开发的优良模板。 

发明内容

本发明提供一种具有很强的抗微生物活性的来源于海南湍蛙(Amolops hainanensis)的一种抗微生物肽Hainanenin-1及其基因、分离纯化、化学合成和应用。 

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：