[发明专利]一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1及其基因、分离纯化、化学合成和应用

权利要求书

1.一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1，其特征在于，是一种从海南湍蛙皮肤分泌液中分离出来的C端含有七元Rana Box的环状多肽，分子量为2278.90道尔顿，等电点为9.50，多肽全序列一级结构为：苯丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸-丙氨酸-缬氨酸-苏氨酸-赖氨酸-亮氨酸-亮氨酸-脯氨酸-丝氨酸-亮氨酸-亮氨酸-半胱氨酸-蛋氨酸-异亮氨酸-苏氨酸-精氨酸-赖氨酸-半胱氨酸。

2.一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1的分离纯化方法，其特征在于，电刺激海南湍蛙收集皮肤分泌液离心去除沉淀，冷冻干燥后经Sephadex G-50凝胶过滤柱层析和反相高压液相色谱后分离纯化后得到。

3.一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1的化学合成方法，其特征在于，根据编码海南湍蛙(Amolops hainanensis)抗微生物肽Hainanenin-5成熟肽的氨基酸序列，用自动多肽合成仪合成其全序列；通过HPLC反相柱层析脱盐纯化，并确定其纯度大于95％；用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其分子量。

4.一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1的基因，其特征在于，抗微生物肽Hainanenin-1前体的基因由320个核苷酸组成，自5’端至3’端序列为：

1 ATGTTGCCCT TGAAGAAATC CATGTTACTC CTTTTCTTCC TTGGGACCAT CAACTTATCT

61 CTCTGTGAGC AAGAGAGAGA TGCCGAAGAA GAAAGAAGAG ACGATGAAGA TAAAAGGGAT

121 GTTGAAGTGG AAAAACGATT TGCATTAGGT GCGGTTACTA AGCTTTTGCC ATCACTGTTA

181 TGTATGATTA CCAGAAAATG TTGAAGCTTG AGCTGGAAAT CATCTGATGA GAAATATAAT

241 TTAGCTAAAT GCACATCAGA TATCTTATAA AAAATAAAAA TTCTCACATA TAAAAAAAAA

301 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

编码海南湍蛙成熟肽Hainanenin-1为第139-201位核苷酸，其氨基酸序列为：Phe¹Ala²Leu³Gly⁴Ala⁵Val⁶Thr⁷Lys⁸Leu⁹Leu¹⁰Pro¹¹Ser¹²Leu¹³Leu¹⁴Cys¹⁵Met¹⁶Ile¹⁷Thr¹⁸Arg¹⁹Lys²⁰Cys²¹(FALGAVT KLLPSLLCMITRKC)。

5.权利要求1所述的海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1具有抗微生物感染的作用，能够作为制备病原微生物感染疾病的治疗药物。

6.权利要求3所述的海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1基因的应用，其特征在于，Hainanenin-1抗微生物肽具有很强的抗微生物作用，溶于灭菌超纯水，用于药理活性检测。