[发明专利]一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法及其试剂盒无效
| 申请号： | 201110440150.0 | 申请日： | 2011-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN102424847A | 公开（公告）日： | 2012-04-25 |
| 发明（设计）人： | 黄金明;王秀革;王长法;鞠志花;李秋玲;齐超;张燕;赵秀新;李荣岭;李建斌;杨宏军;王玲玲;仲跻峰 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院奶牛研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250131 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛查牛退 化性 轴突 携带者 方法 及其 试剂盒 | ||
1.一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法，其特征在于以待测牛的基因组DNA为模板，设计上游引物和下游引物对其进行PCR扩增反应，然后回收PCR扩增片段，用FastDigest限制酶TspRI进行酶切，在酶切反应体系酶切后进行凝胶检测，酶切后凝胶检测酶切DNA片段为307bp的待测牛为正常牛；酶切后DNA片段为307bp、225bp和82bp的检测测牛为退化性轴突病携带者；酶切后DNA片段为225bp和82bp的检测牛为患退化性轴突病牛。
2.一种筛查牛退化性轴突病携带者所设计的PCR扩增引物，其特征在于根据NCBI中MFN2基因序列设计上游引物MFN2F序列为：SEQ ID NO.1，下游引物MFN2R序列为：SEQ ID NO.2。
3.根据权利要求1所述的一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法，其特征在于PCR扩增反应采用25μl PCR扩增反应体系为：模板DNA(100ng/μl)1μl，上游引物MFN2F、下游引物MFN2R各(10μmol/L)0.5μl，2×Taq PCRMasterMix 12.5μl，用双蒸水(ddH2O)补至25μl。
4.根据权利要求1所述的一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法，其特征在于PCR扩增反应条件为：94℃变性4min；然后94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，这一步共35个循环；72℃保持10min；4℃保存。
5.根据权利要求1所述的一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法，其特征在于酶切反应体系采用15μl TspRI酶切反应体系为：PCR扩增产物5μl；10×FastDigest缓冲液1μl；FastDigest限制酶TspRI 0.5μl；ddH2O 8.5μl，酶切反应条件为：65℃消化30min。
6.根据权利要求1所述的一种筛查牛退化性轴突病携带者的方法，其特征在于酶切片段用质量浓度为3.0～4.0％琼脂糖凝胶电泳。
7.一种筛查牛退化性轴突病携带者的试剂盒，其特征在于：该试剂盒是：上、下游引物(10μmol/L)；2×Taq PCR MasterMix；10×FastDigest缓冲液；FastDigest限制酶TspRI；双蒸水(ddH2O)；50bp DNA Ladder Marker中的一种以上数量的试剂。
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