[发明专利]一种碱性蛋白酶的生产方法

权利要求书

1.一种碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：生产过程采用补料分批发酵的方法。

2.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：发酵采用清液发酵。

3.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：发酵所用微生物为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus Y-22，保藏编号为：CGMCC No.5313，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

4.根据权利要求3所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：发酵步骤如下：

(1)种子的培养：从斜面上挑取一环新培养的嗜碱性芽孢杆菌Y-22接入种子培养液中(50mL种子培养基/250mL三角瓶)，200r/min，34℃培养12h；

(2)发酵罐培养：5％v/v接种量转接至液体发酵培养基；温度：34℃；转速：250～450r/min；通风量：1∶0.5～1∶1.5。发酵过程中自动流加氨水及20％v/v的盐酸，使发酵液pH值维持在7.0；

(3)补料分批发酵：在碱性蛋白酶高产菌株发酵产碱性蛋白酶的过程中按一定的比生长速率流加补料培养基，发酵10-30小时控制比生长速率0.12h^-1，30-55小时控制比生长速率0.6h^-1。

5.根据权利要求4所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所用发酵培养基配方为g/L：酵母浸粉17，麦芽糊精100g/L、柠檬酸钠3g/L、氯化钙2.6g/L、K₂HPO₄18g/L、pH自然，标准棉籽饼粉水解液150mL/L。

6.根据权利要求4所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所用补料培养基配方为：麦芽糊精600g/L、柠檬酸钠3g/L、氯化钙2.6g/L、K₂HPO₄18g/L、pH自然，标准棉籽饼粉水解液800mL/L。

7.根据权利要求5或6所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所述标准棉籽饼粉水解液为棉籽饼粉经物理作用及酶水解后得到的上清液。

8.根据权利要求7所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所述标准棉籽饼粉水解液的制备方法步骤如下：

(1)棉籽饼粉加干重2-5倍的水，高压蒸煮20-30分钟，除去对菌体生长有害的棉酚；

(2)加入棉籽饼粉干重1-3％w/w复合酶制剂，45℃，120r/min，搅拌处理120分钟；

(3)板框过滤，滤液即为棉籽饼粉酶水解液；

(4)将棉籽饼粉酶水解液中蛋白浓度稀释为25g/L，即为标准棉籽饼粉酶水解液。

9.根据权利要求7所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所述复合酶制剂为蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶的混合物。

10.根据权利要求9所述的碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：所述复合酶制剂的复配比例为蛋白酶∶纤维素酶∶木聚糖酶∶果胶酶＝3∶1.5∶2.5∶2。