[发明专利]旋毛虫的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域中寄生虫的分子生物学检测方法，特别是涉及一种旋毛虫的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒。

背景技术

旋毛虫病是由旋毛形线虫[Trichinella spiralis(Owen，1835)Railliet，1895](简称旋毛虫)引起的食源性人兽共患寄生虫病，在全世界66个国家或地区均有分布。目前，国际公认的旋毛虫属分为8个种及3个基因型，即旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)、米氏旋毛虫(T5)、纳氏旋毛虫(T7)、巴布亚旋毛虫(T10)及津巴布韦旋毛虫(T11)及T6、T8、T9。我国已发现存在有2种，即旋毛虫(T1)和乡土旋毛虫(T2)。

目前，已知猪、野猪、狗、鼠等150多种动物可作为旋毛虫的宿主，由这些动物互相残食或摄取尸肉而传播。人患旋毛虫病主要因生食或半生食含有幼虫囊包的猪肉或其它动物肉类所致，急性期患者表现为发热、水肿、肌痛、腹泻等症状，感染后可终生带虫，表现为肌肉酸痛无力，重者可因严重的并发症死亡，死亡率为3％～30％。

国际旋毛虫病委员会调查结果显示，自1995年1月至1997年7月已报道的旋毛虫感染人数达10,030人，估计全球至少有6,000万人感染该病。我国1964年至2005年已报道的病例达26,000余人，隐性感染人数达4000万人，由此产生巨大的医疗费用，仅急性感染者的治疗费用就高达数百亿元人民币，而隐性感染所造成的体质下降等各种间接损失则更为巨大。鉴于其暴发频率、感染人数及危害性，在欧盟2006年公布15种重要新发与再发性人兽共患病病种中，旋毛虫病作为唯一的食源性寄生虫病名列其中。

旋毛虫不仅严重危害人类健康，也给养猪业和肉类工业造成巨大的经济损失。世界各国均把屠宰动物的旋毛虫检验作为首检和强制性必检项目，以此切断其由动物向人的传播，由于大量人力、物力及财力的耗费，致使旋毛虫病成为了目前世界范围内投入控制费用最高的寄生虫病。仅以2004年生猪屠宰的旋毛虫病检验费用为例，欧盟5.7亿欧元/屠宰量为2亿头，美国10亿美元/屠宰量为3亿头，我国高达18亿元人民币/屠宰量为6.18亿头(3元人民币/头)。国际旋毛虫病委员会预测在未找到更为有效的检验方法以前，以上各国所公布的检验费用均不可能降低。

目前，迫切需要对旋毛虫感染进行有效的诊断和控制，前者的有效性依赖于检测方法的可靠性，但至今仍未发现有效的检测方法。对于屠宰动物旋毛虫病的检验，国际兽疫局的法规检验方法为镜检法及集样消化法，目前我国也在延用这两种方法。然而，以上两种方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，集样消化法虽可提高检出率，但仍十分繁琐。两种方法的敏感性均可造成肉类的漏检而引起人的感染，存在安全隐患。对于人旋毛虫病的诊断只能凭借病原学检查或血清学检查同询问病史相结合的方法。病原学检查取病人的肌肉压片镜检，查到旋毛虫幼虫囊包即可确诊，但是该方法对发病早期和轻度感染者的阳性率不高，而且不易被患者接受。血清学检查依靠从病人血清中查到旋毛虫特异抗体而确诊，该类方法比较简单、快速，但由于旋毛虫抗体在宿主体内出现的时间较晚，故不能用于旋毛虫病的早期诊断，而且假阳性率较高。因此，寻找早期、简单、特异的旋毛虫检测方法是旋毛虫病研究领域的热点。