[发明专利]副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

猪副嗜血杆菌病，又称革拉泽氏病(Glasser′s disease)，是由副猪嗜血杆菌引起的一种以呼吸道症状、跛行、胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等为特征的猪呼吸道传染病。随着养猪业的发展，猪副嗜血杆菌病已成为近年来严重危害养猪业的新发细菌性传染病，呈世界性分布，并已证实在我国绝大多数猪场存在和流行，可影响2周龄到4月龄的猪，但主要在断奶前后和仔猪阶段发病，常见于5-8周龄的猪，发病率一般为10-15％，严重时死亡率可达50％以上，给我养猪业造成巨大的损失。(蔡旭旺，陈焕春，刘正飞，吴斌，金梅林，Blackall P J.副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定.华中农业大学学报，2005，24：55-58；Oliveira S&Pijoan(2004)Haemophilus parasuis：new trends on diagnosis，epidemiology and control.Vet Microbiol 99：1-12.)

传统的血清分型方法是根据热稳定性可溶性抗原和琼脂扩散试验(AGPT)，已有15种血清型得到证实，而且还有一定数量不能分型的副猪嗜血杆菌(Kielstein P&Rapp-Gabrielson VJ.Designation of 15serovars of Haemophilus parasuis on the basis of immunodiffusion using heat-stable antigen extracts.J Clin Microbiol.1992，30：862～865)。目前已经发现并证实的副猪嗜血杆菌的毒力因子及其潜在的毒力因子有：荚膜、菌毛、外膜蛋白、脂多糖、转铁蛋白、神经氨酸酶等(李静怡，张建民，徐成刚，郭莉莉，陈济铛，廖明.副猪嗜血杆菌主要毒力因子及致病机理研究进展冲国畜牧兽医，2010年第37卷第12期)。副猪嗜血杆菌血清型众多以及很大比例的不能分型的菌株，具有明显的地方性特征，菌株毒力及致病性之间具有明显的差异性，血清型间交叉保护性极差或缺少，因此研制与当地相关型的、具有高效交叉保护力的疫苗是预防和控制副猪嗜血杆菌病的必然要求(Baumann G，Bilkei G.Effect of vaccinating sows and their piglets on the development ofdisease induced by a virulent strain of Haemophilus parasuis serovar 5.Vet.Rec.2002，151：18-21)。

发明内容

本发明的目的是采用免疫原性良好的副猪嗜血杆菌4型YBH04株、5型YBH05株和13型YBH13株分别接种于适宜培养基培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活，加入矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防由4、5和13型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病。

一、生产用毒株

1.菌株来源

用于制造疫苗的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)菌株为YBH04、YBH05和YBH13株，由青岛易邦生物工程有限公司分离、鉴定。国内分离株4型YBH04株(2009年从山东省某猪场病死猪的关节液中分离)和5型YBH05株(2008年从山东省平度某猪场病死猪的关节液中分离)，13型YBH13株(2009年从山东省济南某猪场病死猪的心脏中分离)。以上3个菌株已于2011年11月23日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：YBH04株为CGMCC No.5479、YBH05为CGMCC No.5480和YBH13株为CGMCC No.5501。

2.菌株特点

(1)形态及生化特性  副猪嗜血杆菌菌株YBH04、YBH05和YBH13株菌均为革兰氏阴性，细小杆菌，具有多种不同的形态，从单个的球杆菌到长的、细长的、以致丝状的菌体。

无溶血现象、脲酶试验阴性，氧化酶试验阴性，接触酶试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，吲哚试验阴性并发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、核糖和麦芽糖等碳水化合物。