[发明专利]一种甲型流感病毒抗原和乙型病毒流感抗原的联检试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种一种甲型流感病毒抗原和乙型病毒流感抗原的联检试纸及其制备方法。 

背景技术

流行性感冒，通常称为“流感”，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有很强的传染性，主要通过咳嗽和打喷嚏传播，一般春季和冬季爆发。分为A型(甲型)流感病毒、B型(乙型)流感病毒和C型(丙型)流感病毒。甲型流感病毒具有极强的变异性，乙型病毒次之，而丙型病毒则非常稳定，故甲型病毒和乙型病毒的检测尤为重要。 

根据统计，全球每年的流感病例为6-12亿，其中重症流感为300-500万例，死亡25-50万人，重症流感的病死率可达8％-10％。目前美国每年流感导致的死亡人数超过车祸和艾滋病造成的死亡人数，在我国和发展中国家已成为严重危害人类健康的头号大敌。我国是流感的高发区，流感的流行或局部暴发基本上每年都有，每年有1亿多人遭受流感的困扰，到医院就医者超过50万人。 

现阶段检测流感病毒感染的方法主要包括病毒培养法、RT-PCR法以及胶体金免疫层析法。病毒培养是病毒检测的金标准，但这种检测方法周期很长，一般要3～7天的时间，灵敏度不高；RT-PCR能够4-8小时内对样本实现检测，且灵敏度和特异性很高，但是并不适于在机场、口岸、火车站、医院等人口密度大、人流量大、不易让人群长时间聚集的公共场所；胶体金免疫层析法由于不需要辅助的设备，方便的储运及操作简便非常适合在基层场所使用，但现阶段灵敏度不高，容易造成漏检，尚不能够区分病毒感染亚型。 

中国专利CN200910087632.5公开了一种属于病原体基因快速诊断领域的检测甲型H1N1流感病毒的专用引物和包括该引物的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒以及该引物所对应的靶序列。本发明的专用引物所对应的靶序列，该试剂盒利用基因反转录和等温扩增技术原理，对甲型H1N1病毒核酸进行快速检测， 检测结果可肉眼判定，也可利用电泳进行分析。但是该方法耗时长，费用大，不利于大面积推广和民用化。 

中国专利CN200910085475.4公开了一种流感病毒rRT-PCR检测引物和探针及检测流感病毒的方法，包括甲型流感病毒特异性引物和探针、两组新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物和探针、新甲型流感病毒特异性引物和探针等，4种共12条寡核苷酸引物和探针序列，同时公开了待检样本处理、rRT-PCR反应体系及反应条件、结果分析。该方法的不足也是由于费用昂贵、需要专业的仪器和操作人员需要经过专业培训。故该方法也不适用于普及和民用化。 

同样的，专利号为CN200810022489.7的专利公布了一种借助液相芯片检测流感和H5N1亚型禽流感病毒的方法、申请号为CN201110223913.6的专利公布了甲型/乙型流感病毒核酸双重荧光PCR检测试剂盒、申请号为CN201010171355.9的专利公布了人甲、乙型流感及新甲型H1N1流感病毒一管多检方法及试剂盒、申请号为201110149333.7公布了双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及应用，这些方法都存在费用高、需要专业仪器、检测周期长的问题，不利于流感检测在家庭、在基层及更广泛人群中推广使用。 

申请号为CN200710040792的发明专利多联检测试剂盒公开了一种多项联检的试剂盒，但是该试剂盒是有多条检测条组成的，虽然可以同步联检，但是没有达到最大降低一次性耗材消耗，不够环保。 

申请号为CN200910040975公布了一种用于检测甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸纳米金生物传感器，是通过玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针以及在硝酸纤维素膜上固定两种寡核苷酸探针来检测目标物。但是因为流感会有甲型和乙型之分，该发明就不能实现同时检测的目的，而且，检测时间基本需要在半个小时以上。 

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的流感病毒检测费用昂贵、检测周期长、用纳米金灵敏度稍低、以及不能同时检测甲型和乙型流感病毒的缺陷，而提供一种新的甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原的联检试纸。 

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案： 

一种甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原的联检试纸，所述试纸由样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区、包被有乙型流感病毒抗体的检测区和包被有羊抗兔抗体的控制区，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的兔IgG抗体，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-甲或乙型流感病毒抗体。