[发明专利]一种耐氧化性淀粉酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种耐氧化性淀粉酶突变体，其特征在于SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中催化区域进行蛋氨酸的突变。

2.权利要求1所述的淀粉酶突变体，其特征在于氨基酸的取代位点分别为第307个氨基酸蛋氨酸位点、第135位蛋氨酸位点、第204位蛋氨酸位点、第219位蛋氨酸位点、及第237位蛋氨酸位点。

3.能表达生产权利要求1-2任一所述淀粉酶突变体的载体。

4.能表达生产权利要求1-2任一所述淀粉酶突变体的细胞系或基因工程菌。

5.权利要求1所述淀粉酶突变的的制备方法，其特征在于以嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)为出发菌珠，在对淀粉酶催化区域内的单个或多个氨基酸位点进行突变，提高淀粉酶的耐氧化性。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于具体步骤为：

1)根据嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)的淀粉酶序列，采用化学全合成的方法全合成后克隆到质粒pET-22b(+)中，构建重组质粒pAAQ；

2)利用Swiss-model软件对源自嗜碱芽孢杆菌的淀粉酶进行模拟，获得淀粉酶空间结构；

3)通过对淀粉酶空间结构进行分析，确定要要突变的蛋氨酸位点；

4)设计的突变引物，对淀粉酶基因序列进行定点突变，将蛋氨酸位点突变为丝氨酸，获得含有突变淀粉酶序列的重组载体；

5)将突变后重组载体转化大肠杆菌BL21，诱导表达，获得淀粉酶突变体。

7.权利要求1-3任一所述的淀粉酶在纺织退浆、洗涤剂、化工、食品领域的应用。