[发明专利]一种药物的指纹图谱及其测定方法

权利要求书

1.一种药物指纹图谱的测定方法，其特征在于包含

(a)供试品溶液的制备：取中药提取物，精密称量，置于容量瓶中，加乙醇溶解、定容、过滤即得供试品；

(b)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A：乙腈；流动相B：0.1％甲酸和20mM醋酸铵水溶液；检测波长为254nm；

(c)测定：精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱；

其中所述的药物为大黄提取物、黄连提取物、黄芩提取物或上述三种提取物组成的中药制剂。

2.根据权利要求1任一项所述药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述供试品溶液的制备方法如下：精密称量药物置于50ml量瓶中，加入75％乙醇约40ml，超声40min，加75％乙醇至刻度，摇匀，取适量溶液过0.45um滤膜，取续滤液，即得供试品；其中所述药物为黄连提取物0.09g、大黄提取物0.27g、黄芩提取物0.14g或中药制剂0.5g的一种。

3.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述中药制剂的制备方法为黄连660g、大黄2000g、黄芩1000g；制法为：以上三味药材，分别加水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液分别减压浓缩，喷雾干燥，制得黄芩浸膏粉及大黄、黄连的混合浸膏粉。两种浸膏粉分别制颗粒，干燥，粉碎，加入淀粉、滑石粉和硬脂酸镁适量，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

4.根据权利要求1-4中任一项所述药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述高效液相色谱仪的紫外检测器出来的溶液经过分流，进入质谱仪进行物质测定。

5.根据权利要求5所述药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述质谱仪检测条件如下：电喷雾电离，正离子模式和负离子模式检测，氮气作为鞘气、辅助气和吹扫气；全扫描质量范围：100-1000amu；二级质谱用数据依赖模式采集，全扫描图谱中响度强度最高的2个峰用于二级质谱分析，高纯氦气用作碰撞气，碰撞能量为35ev。

6.根据权利要求6所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述正离子模式检测条件：喷雾电压4.5kV：鞘气为20arb，辅助气为5arb，吹扫气为2arb；毛细管温度：275℃，毛细管电压为25V；所述负离子模式检测条件：喷雾电压4.5kV：鞘气为20arb，辅助气为5arb，吹扫气为2arb；毛细管温度：275℃，毛细管电压为25V。

7.根据权利要求1所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述的色谱柱为安捷伦的Eclipse Plus C18。

8.根据权利要求7所述的药物指纹图谱的测定方法，其特征在于所述梯度洗脱的程序如下：其中下述比例为体积比

0min时，流动相A∶流动相B＝5∶95

5min时，流动相A∶流动相B＝14∶86

25min时，流动相A∶流动相B＝20∶80

50min时，流动相A∶流动相B＝25∶75

80min时，流动相A∶流动相B＝60∶40

85min时，流动相A∶流动相B＝80∶20

91min时，流动相A∶流动相B＝80∶20

92min时，流动相A∶流动相B＝5∶95

100min时，流动相A∶流动相B＝5∶95；

其中柱温为25-30℃，流速为1.0ml/min。