[发明专利]多功能荧光免疫层析快速定量检测卡

说明书

技术领域

本发明涉及免疫测定领域。具体而言，本发明涉及用于检测样品中待测抗原的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡。本发明还涉及此定量检测卡的制备方法及其在食品安全检测中的应用。

背景技术

目前的免疫层析快速检测卡多以胶体金、彩色乳胶微粒或者荧光素作为标记物。

基于胶体金标记技术开发的快速检测产品具有灵敏度低，只能定性或者半定量，批间差异较大等问题。

彩色乳胶微粒虽然批间差有所改进，但灵敏度依然较低，也只能定性或半定量。

基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度有了较大提高，也能进行定量检测。

近年来，食品安全事故频出，食品安全越来越受到政府和广大群众的重视。三聚氰胺、瘦肉精等事件将食品安全问题暴露在了人民群众跟前。

对于三聚氰胺、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等小分子检测，检测方法多为色谱分析和免疫分析。色谱分析包括高效液相色谱、气质联用色谱等。而免疫分析主要有酶联免疫法(ELISA)，胶体金快速诊断等。

市面上的快速检测试纸只能固定的检测一个或者两个项目，如检测三聚氰胺的检测卡只能用于检测三聚氰胺，而检测盐酸克伦特罗的检测卡只能检测盐酸克伦特罗。当需要检测多个项目时，需要准备多种检测卡。

因此本领域迫切需要灵敏度高、检测用途广的新型检测卡，尤其需要能够实现一卡多用的检测卡。

发明内容

本发明开发了一种免疫荧光快速定量检测卡，只要针对不同的检测项目更换相应的样品处理液，即可检测不同的物质，并且得到精确定量结果，真正实现了一卡多用的目的。

本发明的提供了一种新型的基于免疫层析技术的多功能快速定量检测试剂，特征在于样品处理液为荧光素标记的抗原和生物素标记的抗体，免疫层析膜上固定有亲和素(链霉亲和素)和羊抗鼠抗体。

本发明所述的荧光免疫层析快速定量检测卡，该检测卡为底衬上依次搭接样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上有检测线(T线，固定有亲和素)和质控线(C线，固定有羊抗兔抗体)。

针对不同的检测项目，配备不同过的样品处理液，样品处理液包括A、B两个组分，A液中含有荧光素标记的待测抗原分子和荧光素标记的兔抗，B液中含有生物素标记的针对待测抗原的鼠单克隆抗体。

如检测盐酸克伦特罗的样品处理液A中含有荧光素标记的盐酸克伦特罗抗原和荧光素标记的兔抗，B液中含有生物素标记的盐酸克伦特罗单克隆鼠抗。

检测莱克多巴胺的样品处理液A中含有荧光素标记的莱克多巴胺抗原和荧光素标记的兔抗，B液中含有生物素标记的莱克多巴胺单克隆鼠抗。

检测三聚氰胺的样品处理液A中含有荧光素标记的三聚氰胺抗原和荧光素标记的兔抗，B液中含有生物素标记的三聚氰胺单克隆鼠抗。

标记用的荧光素可以是市售的各种荧光标记物，如FITC、罗丹明、Invitrogen公司的Alexa Fluor荧光标记物系列等。

本发明可用于检测各种小分子抗原或半抗原，检测原理同免疫竞争法。

检测步骤：

将待测样本加入样品处理液A中，然后再在样本处理液中加入样本处理液B，待测样本中的抗原与荧光素标记的抗原相互竞争与B液中的生物素标记的单克隆抗体结合，样本中待测抗原浓度越高，则荧光素标记的抗原与生物素标记的抗体结合的量越少。

将混合液滴加在检测卡中，抗原抗体复合物通过层析作用依次通过C、T线，生物素标记的单克隆抗体与T线的亲和素结合，而混合液中的荧光素标记兔抗则被C线的羊抗兔抗体捕获。

待测样本中的抗原浓度越高，则荧光素标记的抗原与生物素标记的抗体量形成抗原抗体复合物的量就越少，T线上被亲和素捕获的荧光免疫复合物的量也就越少，待测样本中抗原的浓度与T线信号成负相关。

而C线上捕获的荧光素标记兔抗信号值则相对固定。

通过荧光检测仪对检测卡进行扫描，根据抗原浓度与荧光信号成负相关，获得待测样本中抗原的准确浓度。

本发明的另外一个目的在于提供一种新型的基于免疫层析技术的多功能快速定量检测卡的制备方法。

本发明所述的多功能快速定量检测卡的制备方法，包括以下步骤：

(1)荧光素标记抗原

(2)荧光素标记兔抗

(3)生物素标记针对特定抗原的单克隆抗体

(4)样品处理液A制备

(5)样品处理液B制备

(6)喷膜

将亲和素稀释到0.5～2mg/ml，用喷膜仪定量喷在硝酸纤维素膜检测区T。