[发明专利]多功能荧光免疫层析快速定量检测卡

权利要求书

1.一种多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，该检测卡包括：

a)样品处理液A，其含有荧光素标记的待测抗原和荧光素标记的对照；

b)处理液B，其含有生物素标记的针对待测抗原的单克隆抗体；

c)检测卡，其包括检测线区域和质控线区域，所述检测线区域固定有亲和素，所述质控线区域固定有针对所述对照的抗体。

2.根据权利要求1所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，其中所述待测抗原浓度为1～100ng/ml，所述对照终浓度为1～20ng/ml，所述单克隆抗体终浓度为5～50μg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，其中所述对照是兔抗，针对所述对照的抗体是羊抗兔抗体。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，其中所述待测抗原包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、三聚氰胺。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，其中所述荧光素包括FITC、罗丹明、Alexa Fluor荧光标记物系列。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡，其中所述待测抗原包括小分子抗原和半抗原。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡在食品安全检测中的应用。

8.一种通过权利要求1-6中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡检测样本中待测抗原的方法，其包括下述步骤：

i)将待测样本加入样品处理液A中，然后再在样本处理液中加入样本处理液B，得到混合液，其中，待测样本中的抗原与处理液A中所述荧光素标记的待测抗原相互竞争与处理液B中所述单克隆抗体结合形成抗原抗体复合物，样本中待测抗原浓度越高，则处理液A中所述荧光素标记的待测抗原与处理液B中所述单克隆抗体结合的量越少；

ii)将i)中得到的混合液滴加在检测卡中，所述抗原抗体复合物通过层析作用依次通过质控线区域、检测线区域，生物素标记的单克隆抗体与检测线区域的亲和素结合，而混合液中的荧光素标记对照则被质控线的该对照的抗体捕获；待测样本中的抗原浓度越高，则荧光素标记的抗原与生物素标记的抗体量形成抗原抗体复合物的量就越少，检测线上被亲和素捕获的荧光免疫复合物的量也就越少，待测样本中抗原的浓度与检测线信号成负相关；而质控线上捕获的荧光素标记的对照的信号值则相对固定；

iii)通过荧光检测仪对检测卡进行扫描，根据抗原浓度与荧光信号成负相关，获得待测样本中抗原的准确浓度。

9.一种权利要求1-6中任意一项所述的多功能荧光免疫层析快速定量检测卡的制备方法，其包括以下步骤：

i)制备荧光素标记的待测抗原、荧光素标记的对照、生物素标记的针对待测抗原的单克隆抗体；

ii)制备处理液A、处理液B；

iii)喷膜，其包括将亲和素稀释到0.5～2mg/ml，用喷膜仪定量喷在载体膜检测线区域；

iv)将针对对照的抗体稀释到0.5～2mg/ml，用喷膜仪定量喷在载体膜的质控线区域；质控线、检测线的喷膜液量为0.5～2μl/cm；

v)大卡粘贴，在带有背胶的底板上依次粘帖载体膜、样品垫、吸水纸；

vi)干燥，将上述喷好试剂的大卡在恒温烘箱或者烘房中烘干6～24小时；

vii)切条、装卡，将干燥好的大卡用切条机或者滚刀切割成检测卡，将切割好的检测卡装在塑料外壳中，并用铝箔袋或塑料袋封装，封装袋中加入干燥剂。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其中所述的载体膜为硝酸纤维素膜。