[发明专利]肝素酶I融合蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体是涉及一种肝素酶I融合蛋白。

背景技术

肝素酶，也称肝素裂解酶，是目前已知仅有的可降解肝素的酶。肝素酶最早是在肝素黄杆菌Flavobacterium Heparinum中发现的，共有三种，分别为肝素酶I(EC 4.2.2.7)、肝素酶II(EC unassigned)、肝素酶III(EC 4.2.2.8)。其中，肝素酶I以肝素为主要底物，肝素酶II以肝素和硫酸乙酰肝素为底物，而肝素酶III以硫酸乙酰肝素为主要底物

肝素酶具有广泛而重要的用途。通过肝素酶选择性降解可以有助于研究多糖的结构和序列；肝素酶可以用于临床手术后血液的去肝素化；肝素酶可以用于制备低分子量肝素。其中，肝素酶I是制备低分子量肝素的主要酶。

目前，已发现肝素酶I在多种微生物中都有表达，包括肝素黄杆菌Flavobacterium Heparinum(Ram Sasisekharan et al.，Cloning and expression of heparinase I gene from Flavobacterium heparinum.Proc.Natl.Acad.Sci 1993 vol.90：3660-3664)、粪便拟杆菌(Wan-Seok Kim et al.，Purification and Characterization of Heparin Lyase I from Bacteroides stercoris HJ-15.J.Biochem.Mol.Biol 2000，vol.37：684-690)、多形拟杆菌(Yongde Luo et al.，High yield，purity and activity of soluble recombinant Bacteroides thetaiotaomicron GST-heparinase I from Escherichia coli.Arch Biochem Biophys 2007，vol.460：17-24)等。肝素酶I可以从这些微生物的发酵液中提取，但产量很低，且通常需要多步色谱纯化，又进一步降低了得率。因此，采用天然提取的方法制备肝素酶I成本很高，限制了肝素酶I的工业化应用。

Ram Sasiekharan等(Ram Sasisekharan et al.，Cloning and expression of heparinase I gene from Flavobacterium heparinum.Proc.Natl.Acad.Sci l 993vol.90：3660-3664)首先从肝素黄杆菌中克隆了肝素酶I基因，并在大肠杆菌中重组表达，证明重组肝素酶I具有与天然肝素酶I相同的活性。Steffen Ernst等(Steffen Ernst et al.，Expression in Escherichia coli，purification and characterization of heparinase I from Flavobacterium heparinum，Biochem.J.1996，vol 315：589-597)利用pET系统在大肠杆菌中实现了肝素酶I的高效表达，但绝大部分产物形成包涵体，需要经过变复性才能得到有活性的蛋白。