[发明专利]短双歧杆菌及食品中甲胺磷农药残留的检测方法

权利要求书

1.一株短双歧杆菌，其特征在于，所述菌株为短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)LJM-006，已于2011年10月28日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5418。

2.一种食品中甲胺磷农药残留的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)菌株活化：将权利要求1所述的短双歧杆菌LJM-006菌株接种于营养琼脂斜面培养基上，调节该培养基的pH值至6.8~7.2，于35~37℃下进行优化培养，并进行转种继代培养；

(2)菌悬液制备：取步骤(1)所得短双歧杆菌LJM-006接种于营养琼脂斜面培养基，35±2℃厌氧培养24小时，用灭菌生理盐水将菌苔洗下，制成悬液，调整其OD₆₀₀值至0.25~0.35，置2-8℃冰箱中保存；

(3)检测管制备：以重量计，取蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，K₂HPO₄ 2g，MgSO₄·7 H₂O 0.5g，MnSO₄·4H₂O 0.2g，低聚果糖3g，柠檬酸二铵2g，吐温-80 1mL，蒸馏水1L，加热溶解校正pH值至6.5，115℃高压灭菌15-20分钟，冷却温度为50~65℃，并迅速取10 mL上述液体，注入10 mL试管内，作为检测管，于0~4℃下直立静置，密封后0~4℃下保存、备用；

(4) 绘制标准曲线并建立回归方程：选择浓度为0mg/L、0.25mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L的甲胺磷标准品溶液，且0mg/L为阴性对照；取所述甲胺磷标准品溶液20~100μL加入所述检测小管内，37℃厌氧培养8~12h，分别测定样品反应管和阴性对照反应管的OD₅₀₀值；以B/B₀为纵坐标Y，甲胺磷浓度的对数值为横坐标X，绘制标准曲线，建立甲胺磷含量与B/ B₀的线性回归方程Y=－24.68X + 66.72；其中B值为样品反应管的OD₅₀₀值，B₀值为阴性对照反应管的OD₅₀₀值，甲胺磷的线性范围为0.01~100mg/L，检测下限达到0.1mg/L， R²为0.9902；

(5)样品前处理：取待检的食品样品匀浆组织5g，用无菌1%磷酸盐缓冲液20 mL稀释，漩涡混匀，于80℃水浴加热5 min，冷却后于5，000 r/min离心15 min，取上清液作为供试样品液；

(6)样品检测：取步骤(5)所得供试样品液20~100μL加到所述检测小管中，密闭封口后于35±2℃厌氧培养8~10小时，并测定样品反应管和阴性对照反应管的OD₅₀₀值，根据所得各样品的B/B₀值在标准曲线上求出其对应的甲胺磷质量浓度，或代入步骤(4)所得回归方程计算样品质量浓度的对数值X，求其反对数，即为样品中所含甲胺磷的质量浓度。