[发明专利]以根为外植体的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法

权利要求书

1.以根为外植体的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法，步骤包括：

（1）愈伤组织的诱导：

将诺丽无菌苗的根切下，剪成0.5cm～1cm的小段作为外植体，轻轻接入培养基中，并使外植体充分与培养基接触，培养基为MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.5mg/L 6-BA，接种约15天陆续形成细小颗粒状愈伤，颜色呈土黄色或绿色，硬度适中； 

（2）愈伤组织上不定芽的诱导：

于20天时观察，愈伤组织上陆续分化出不定芽，待不定芽长到约1cm时将其切下，于MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.0 mg/L 6-BA或MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.5 mg/L 6-BA下培养35天～40天；

（3） 不定芽的再生：

当步骤（2）中长出的不定芽长到1cm～2cm时，将其剪下，接入MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.0 mg/L 6-BA 的中培养约30天；

（4） 壮苗生根：

从步骤（3）培养得到的健壮植株中，切取茎尖或长约1 cm的其它带芽茎段，接种于MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+0.3 mg/L NAA中诱导生根，培养30～50天，得到完整植株； 

    （5） 移栽：

    将诺丽根系已发育良好的培养瓶移至遮光率75%的温室中炼苗7天后，从培养瓶中移出诺丽试管苗，洗去琼脂，剪去根部附近的叶片，移植到苗盘中，适量喷水保持叶片及土壤湿润，在自然光照下正常管理；

以上MS培养基pH值为5.8；培养基均在1.1 kg/cm²的压力、121℃下灭菌20 min；愈伤组织的诱导培养试验均在25±2℃和2000 lx光照强度下进行，每天光照12h。

2.如权利要求1所述的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法，其特征是将步骤（1）培养诱导约28天的愈伤组织颗粒转入MS（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.5mg/L 6-BA培养基上进行愈伤组织的继代培养，再按照以上所述的步骤（2）～（5）进行操作。