[发明专利]一种用于检测牙鲆感染β诺达病毒的特异性引物及其检测方法无效
| 申请号： | 201110407736.7 | 申请日： | 2011-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN102367495A | 公开（公告）日： | 2012-03-07 |
| 发明（设计）人： | 孙金生;张亦陈;刘逸尘;耿绪云;顾中华;杜宏薇 | 申请（专利权）人： | 天津师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300387 天津市西青区宾水西道3*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 感染 病毒 特异性 引物 及其 方法 | ||
1.一种用于检测牙鲆感染β诺达病毒的特异性引物，其特征在于：包括2条N2L2fw和N2L2rw外侧引物序列：CGTCCGCTGTCCATTGAC和GGGGCTGCTCATCAGAGT；2条N2L2fn和N2L2rn内侧引物序列：GCAGGTGTGCCAGCATTTCCTTTTTACAGCCTTGGAACTGGAGA和CTGGTTTCGCTGGGGCATCTTTTTGTAGGCAACGCCATCTGTG。
2.一种采用权利要求1所述的特异性引物快速检测牙鲆感染β诺达病毒的方法，其特征在于按如下步骤进行：
（1）采用权利要求1所述的2条外侧引物和2条内侧引物序列，利用逆转录酶和链置换型BstDNA聚合酶，对供试的样品进行逆转录和链置换式扩增反应，反应进行90分钟；反应的总体积为25μL，其各种成分分别为：预混引物5μL，dNTP 4μL，1×Thermopol Roaction Buffer 2.5μL，M-Mlv反转录酶 1μL，Bst DNA聚合酶 1μL，模板5μL，DEPC水 6.5 μL；混匀后42℃，10min；65℃，45min；80℃，10min；4℃保存；其中引物浓度均为10μM的预混引物体积比为：N2L2fn：N2L2fw：N2L2rn：N2L2rw=4：1：4：1；
（2）利用荧光染料SYBR GREEN I呈现反应结果，在可见光下肉眼即可辨识，或利用紫外观察箱辅助观察；其中所述的模板样品可以是病灶组织的粗提液，或是由其抽提的RNA，还可以是由抽提的RNA反转录获得的cDNA等三种类型样本。
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