[发明专利]副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及畜类生物制药技术领域，具体地说，本发明涉及一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗及其制备方法。 

背景技术

副猪嗜血杆菌病和猪链球菌病是目前我国猪群中最主要的两种细菌传染病。副猪嗜血杆菌病是副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)引起的猪的多发性浆膜炎和关节炎，该病又称为猪革拉泽氏病(Glsser’s Disease)。副猪嗜血杆菌可以影响从2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶后和保育阶段发病，通常见于5～8周龄的猪，发病率可达40％，死亡率可达50％。主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等。此外，副猪嗜血杆菌还可引起败血症，并且在急性感染后可能留下后遗症，即母猪流产、公猪慢性跛行。在大量分离副猪嗜血杆菌的基础上，发现该菌的血清型复杂多样，按Kieletein-Rapp-Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法，至少可将副猪嗜血杆菌分为15个血清型；根据我国血清流行病学调查和分离菌株的鉴定，以4、5型最为流行。近年来，由于我国目前饲养技术的调整进行不当，以及突发新的呼吸道综合征，使得该病日趋流行，危害日渐严重。 

猪链球菌病是一种人畜共患的急性、热性传染病，表现为急性出血性败血症、心内膜炎、脑膜炎、关节炎、哺乳仔猪下痢和孕猪流产等，在特定诱因作用下，发病猪死亡率可达80％，严重影响养猪业的发展。猪链球菌病在我国华南、西南、华东、江西及江苏等地曾大面积爆发流行过，发病率和死亡率都较高，造成了严重的经济损失，主要血清型为兰氏C群，其次为兰氏D群、E群。近年来，在猪链球菌 众多血清型中，猪链球菌2型(R群)是猪的最主要病原，致病性最强，从表征健康的猪体扁桃体内分离的所有猪链球菌中，2型多达50.6％，而且可感染特定人群发病，并可致死亡，危害严重，其中1998年江苏部分地区爆发的猪链球菌，造成25人感染，14人死亡；2005年四川部分地区爆发2型疫情，造成205人感染，37人死亡；根据流行病学调查资料显示，我国C群链球菌依然存在，而猪链球菌2型有后来居上的趋势。 

采用疫苗进行免疫预防是国内外控制副猪嗜血杆菌病和猪链球菌病的根本手段，而市场销售的商品疫苗只有副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(血清4型MD0322+血清5型SH0165)、副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(Z-1517株)、副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(血清1型SV1+血清6型SV6)，猪链球菌C群活疫苗、猪链球菌二价灭活疫苗(2型+马链球菌兽疫亚种)，这些疫苗的应用起到了一定的预防作用，但随着病原流行株和混合感染已经使现有疫苗很难达到预期的免疫效果，而且市售商品疫苗需多次免疫，成本较高，对猪只的应激较大；另外同时针对控制副猪嗜血杆菌病和猪链球菌病的疫苗，国内外也还是空白。因此，需要发明一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗(JS株+ZJ株+SC株)以解决上述问题。 

专利CN101745105A公开了一种猪链球病、多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法，该疫苗是以已灭活的兰氏C群马连球菌兽疫亚种C55138株培养液，猪链球菌2型HA9801株培养浓缩液，巴氏杆菌荚膜A群菌培养浓缩液、巴氏杆菌荚膜B群菌培养浓缩液等菌量混合作为抗原，以氢氧化铝凝胶作为佐剂制成，其浓缩过程采用沉淀法，去除毒素过程中不能最大限度去掉内毒素和培养基中的血清杂蛋白。 

专利CN101721696A公开了一种猪副嗜血菌血清4型、5型、13型三价油乳剂灭活疫苗。它是应用我国猪副嗜血菌三个主要的流行血清型和分离株作为抗原，通过用TSB肉汤培养扩繁24h后，经过0.3％甲醛灭活11～13h，三个血清型的抗原以1∶1∶1的比例混合，然后加入与抗原总体积相等的油相，再经乳化制备而成。该疫苗佐剂为白油，此佐剂疫苗副反应较大，会在注射部位形成炎症或肿胀；另外据研究 资料显示，使用矿物油佐剂会在一定程度上激发和提高猪圆环等猪病的发病率。而且，该疫苗制备过程中，所获得的抗原没有灭活后灭活效果的判定及相关检验，无法得知抗原灭活是否完全，所获得的抗原不能作为制苗用抗原。 

因此，现急需发明一种副作用小，不含内毒素和不含杂蛋白，可同时免疫预防由副猪嗜血杆菌引起的副猪嗜血杆菌病和猪链球菌引起的猪链球菌病及二者的混合感染，安全有效的疫苗及其制备技术。 

发明内容