[发明专利]副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗，包括：抗原和佐剂，其中，所述抗原包含副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种的灭活抗原浓缩-重悬稀释液。

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种的灭活抗原浓缩-重悬稀释液的总含量为疫苗总量的70％～90％(V/V)。

3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种的灭活抗原浓缩-重悬稀释液的体积比为2.5∶2.5∶1∶1～3.5∶3.5∶1∶1。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗含副猪嗜血杆菌血清4型JS株灭活抗原浓缩-重悬稀释液灭活前活菌数不少于1.0×10⁹CFU/mL；所述副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株灭活抗原浓缩-重悬稀释液灭活前活菌数不少于1.0×10⁹CFU/mL；所述猪链球菌2型SC株灭活抗原浓缩-重悬稀释液灭活前活菌数不少于5×10⁸CFU/mL；所述马链球菌兽疫亚种灭活抗原浓缩-重悬稀释液灭活前活菌数不少于5×10⁸CFU/mL。

5.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述佐剂为兽医学可接受的水性佐剂，其含量为10％～30％(V/V)；所述兽医学可接受的水性佐剂为Montanide GEL系列佐剂，包括GEL 01 PR或Montanide PET GEL A。

6.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗中还含有防腐剂，包括硫柳汞、二甲基汞或叠氮钠，其含量为疫苗总量的0～0.01％(V/V)。

7.一种权利要求1～6中任意一项所述疫苗的制备方法，包括：

步骤A，将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种分别进行繁殖制备其生产用毒株，并对该产物进行纯粹检验；

步骤B，将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种生产用毒株分别接种到其制苗用培养基中进行增殖培养制得抗原液，并对该产物进行纯粹检验及活菌计数；

步骤C，副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种抗原液分别经灭活制得其灭活抗原液，并对该产物进行灭活检验和安全性检验；

步骤D，副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种灭活抗原液分别经浓缩制得其灭活抗原浓缩液；

步骤E，将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种灭活抗原浓缩液与佐剂混合乳化制备副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活乳剂疫苗，并对该产物进行无菌检验、安全检验和效力检验；

步骤F，副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活乳剂疫苗分装、贮存；

其特征在于：步骤E包括用稀释剂将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株、猪链球菌2型R群SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种的抗原浓缩液重悬稀释；将所获得的四种抗原浓缩-重悬稀释液混合，再加入佐剂混合乳化，并在乳化结束前加入防腐剂，制得副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤E中所述稀释剂为生理盐水；所述重悬稀释包括：将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、5型ZJ株的抗原浓缩液稀释至浓度为2.8×10⁹CFU/mL～4.5×10⁹CFU/mL，将猪链球菌2型SC株和猪链球菌C群马链球菌兽疫亚种的抗原浓缩液均稀释至5.0×10⁹CFU/mL～5.5×10⁹CFU/mL。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤B中所述制苗用培养基包括：副猪嗜血杆菌培养基及其辅助因子，猪链球菌培养基及其辅助因子；其中，所述副猪嗜血杆菌培养基为胰酪胨大豆肉汤培养基，其辅助因子包括小牛血清、葡萄糖；所述猪链球菌培养基为改良马丁肉汤培养基，其辅助因子包括犊牛血清、葡萄糖。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤D采用切向流超滤系统进行浓缩，并同时除去毒素和杂蛋白，所用超滤膜的截留分子量为500KD～1000KD。