[发明专利]含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌的用途

权利要求书

1.含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌的用途，其特征是将含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌和巨大芽孢杆菌接种到发酵培养基中，培养，获得2-酮基-L-古龙酸。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌的构建为：

(1)山梨酮脱氢酶基因的体外扩增：

采用细菌基因组提取试剂盒提取氧化葡糖杆菌基因组为模板；以SEQ ID No.1所示序列为上游引物，以SEQ ID No.2所示序列为下游引物，进行PCR扩增，回收如SEQ ID No.3所示的PCR扩增产物；

(2)编码山梨酮脱氢酶基因载体的构建：

取步骤(1)获得的PCR扩增产物用HindIII酶和BamHI酶双酶切；取载体pBBR1用KpnI酶和HindIII酶双酶切；连接，转化入大肠杆菌DH5α中，获得编码山梨酮脱氢酶基因载体；(3)氧化葡糖杆菌的转化：

取步骤(2)所得编码山梨酮脱氢酶基因载体在1800V条件下电击转化入氧化葡糖杆菌，获得含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征是将含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌和巨大芽孢杆菌接种到发酵培养基中，使含有编码山梨酮脱氢酶基因载体的氧化葡糖杆菌的密度为4×10⁸cfu/ml，使巨大芽孢杆菌的密度为4×10⁸cfu/ml，培养条件为在30℃，250rpm条件下培养120h，获得2-酮基-L-古龙酸；

所述发酵培养基为：按比例称取L-山梨糖80g，玉米浆20g，尿素12g，KH₂PO₄1g，MgSO₄0.5g，CaCO₃1g，加水至1L，调pH为7.0，121℃灭菌20min。