[发明专利]利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法

权利要求书

1.一种利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，步骤是：

(1)糖化液制备：取玉米芯木糖渣，以15～35个滤纸酶活单位(FPA)每克干木质纤维素的量添加纤维素酶液，在35～55℃下糖化60～80h；收集糖化液于75～85℃下水浴30～60min使残余纤维素酶失活，然后将糖化液于7000～10000rpm下离心6～10min，得澄清的糖化液；

(2)糖化液的脱毒处理：将上述糖化液水浴加热至80℃，再加入其质量百分比为0.6～1.2％的活性炭，搅拌30～50min，然后真空抽滤去除活性炭，得脱毒的糖化液；

(3)利用糖化液发酵隐球酵母：以脱毒的糖化液、4g/l酵母粉的配方制备产油糖化液发酵培养基，将活化好的隐球酵母(Cryptococcus curvatus)以体积百分比为4～10％的接种量接种于产油糖化液发酵培养基中，于30±2℃、200±50rpm，摇床震荡培养60～80h，得含单细胞油的发酵液；

(4)单细胞油粗提：将步骤(3)的发酵液于7000～9000rpm下离心8～15min收集菌体，蒸馏水清洗菌体3～4次；以酸热-有机试剂法提取单细胞油，即：以3g湿菌体∶10ml的比例加入4M HCl，涡旋混合后，沸水浴60min，再冰水浴30min；然后按3g湿菌体∶5ml的比例加入无水乙醇，按3g湿菌体∶15ml的比例加入乙醚，震荡后再按3g湿菌体∶15ml的比例加入石油醚，振荡放气，收集有机试剂层，烘干挥发去除有机试剂后得单细胞油。

2.如权利要求1所述利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，其特征在于：步骤(1)所述纤维素酶添加量为20～30个滤纸酶活单位每克干木质纤维素，糖化温度为40～50℃，糖化时间为70～80h。

3.如权利要求1利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，其特征在于：步骤(2)所述活性炭的质量百分比为0.8～1.0％，搅拌时间为30～35min。

4.如权利要求1利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，其特征在于：步骤(3)所述隐球酵母的培养条件是：30℃、200rpm摇床震荡培养65～75h。

5.如权利要求1利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，其特征在于：步骤(4)所述发酵液于8000rpm下离心10min收集菌体。