[发明专利]一种检测长链非编码RNA-HOTAIRM1的方法

权利要求书

1.一种检测长链非编码RNA-HOTAIRM1的方法，通过以下步骤实现：

（1）采用RNA抽提试剂提取组织和血浆中总RNA，DNaseⅠ去除基因组DNA后采用逆转录试剂进行逆转录合成cDNA；

（2）分别以HOTAIRM1和GAPDH的外侧引物按照以下PCR反应体系配制反应液：1×PCR buffer、0.1μM的外侧上下游引物引物、1U的DNA聚合酶、0.2mM的dNTPs，取2μL的cDNA模板，反应体积为20μL；按照95℃变性5分钟，95℃ 30秒、55℃ 30秒，72℃ 30秒进行15个循环预扩增；

（3）取2.0μL预扩增产物加入如下PCR反应液中：1×TaqMan 通用PCR 缓冲液，0.2μM的内侧上下游引物引物和0.1μM的荧光探针，反应体积为10μL，按照95℃变性2分钟，95℃ 15秒、60℃ 1分钟，扩增40个循环；

（4）根据荧光曲线读取Ct值，按照下述公式计算HOTAIRM1的相对表达量：HOTAIRM1相对表达量=2^－ΔCt（ΔCt=Ct _HOTAIRM1－Ct _GAPDH）；

所述特异性内外侧引物和荧光探针的序列分别如下：

HOTAIRM1外侧引物：

outer-hotiarm1-F: GCTGGAGCGAAGAAGAGCAA，

outer-hotiarm1-R：CAAACACCCACATTTCAACCC；

HOTAIRM1内侧引物：

inner-hotiarm1-F：GAACTGGCGAGAGGTCTGTTTT，

inner-hotiarm1-R：CCCCATAAATCCCTCCACATT；

HOTAIRM1荧光探针：

hotiarm1-probe: FAM-CCTGAACCCATCAACAGCTGGGAGA-TAMRA 

GAPDH外侧引物：

outer-gapdh-F：GGCGCTGAGTACGTCGTGGA, 

outer-gapdh-R：GTGGTGCAGGAGGCATTGCTGAT；

GAPDH内侧引物：

inner-gapdh-F：GCGTCTTCACCACCATGGA，

inner-gapdh-R：TGGTTCACACCCATGACGAA；

GAPDH荧光探针为：

hotiarm1-probe: FAM-CCTGAACCCATCAACAGCTGGGAGA-TAMRA。

2.根据权利要求1所述的一种检测长链非编码RNA-HOTAIRM1的方法，其特征在于， FAM为荧光报告基团，TAMRA为荧光淬灭基团。