[发明专利]通用荧光标记探针的PCR-LDR基因多态性测序方法

权利要求书

1.一组用于基因多态性测序的核酸序列包括：

a)至少一条LDR标记探针，包括三部分，第一部分位于5’端且和待测模板严谨配对，第二部分位于3’端且和通用模板5’序列严谨配对，第三部分位于上述两部分序列中间，是一段用于调整探针长度的、和待测模板或通用模板或其他探针序列均无同源性的随机序列，该探针的5’磷酸化；

b)2到4条LDR检测探针，每条包括两部分，一部分位于3’端且和待测模板严谨配对，另一部分位于5’端是一段用于调整探针长度的、和待测模板或通用模板或其他探针序列均无同源性的随机序列，且该2到4条检测探针通过设计长度不同的随机序列使检测位点上不同的2到4种碱基对应不同的LDR产物长度；

c)至少一条通用荧光标记探针，该探针的5’端磷酸化，3’端用荧光标记并且和通用模板d)的5’端序列严谨配对；

d)至少一条通用模板，其5’端序列和所述通用荧光标记探针c)严谨配对，其3’端序列和所述LDR标记探针a)严谨配对。

2.根据权利要求1所述的一组用于基因多态性测序的核酸序列，其特征在于，所述的待测模板为待测序的多态性序列经PCR扩增后的产物。

3.根据权利要求1所述的一组用于基因多态性测序的核酸序列，其特征在于，所述的LDR标记探针a)和LDR检测探针b)与待测模板严谨配对部分的长度范围均为10-25个核苷酸。

4.根据权利要求1-3所述的一组用于基因多态性测序的核酸序列，其特征在于，所述的核酸序列a)-d)中的只是一种为DNA。

5.根据权利要求4所述的一组用于基因多态性测序的核酸序列，其特征在于，所述的核酸序列a)-d)均为DNA。

6.一种基因多态性测序方法，包括如下步骤：

(1)提供权利要求1所述的一组核酸序列；

(2)LDR反应，获得荧光标记的2到4条长度不同的LDR产物，对应检测位点上2到4种不同的碱基；

(3)通过荧光标记检测长度不同的LDR产物。

7.根据权利要求6所述的基因多态性测序方法，其特征在于，在所述的LDR反应之前有一个PCR反应以扩增待测序的多态性序列，且PCR引物与所述的核酸序列a)-d)均无同源性。

8.一种基因多态性测序试剂盒，包括含权利要求1所述的一组核酸序的LDR反应试剂。

9.一种基因多态性测序试剂盒，包括PCR反应试剂、和含权利要求1所述的一组核酸序的LDR反应试剂。

10.一种基因多态性测序试剂盒，包括核酸提取试剂、PCR反应试剂、和含权利要求1所述的一组核酸序的LDR反应试剂。