[发明专利]一种长期培养无菌松苗的方法有效
| 申请号： | 201110388418.0 | 申请日： | 2011-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN102487822A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | 朱丽华;叶建仁;吴小芹;李清清;安会翠 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00;A01G31/00 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 长期 培养 无菌 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种长期培养无菌松苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备PDA平板备用；
（2）制备无菌松树成熟种子，移入PDA琼脂平板，25℃，培养至萌发，获得无菌幼苗；
（3）制备DCR液体培养基，pH5.8，分装于培养容器；
（4）在底部带小孔容器底部垫上脱脂棉，上部填入珍珠岩，将该容器置于盛有DCR液体培养基的培养容器中，121℃高压灭菌，备用；
（5）将无菌幼苗移植于珍珠岩中，于温度24~26℃、光照2000 Lux、每日光照14~18h条件下培养，定期更换DCR新鲜培养液，直至获得所需年龄的无菌松苗。
2.根据权利要求1所述的长期培养无菌松苗的方法，其特征在于：步骤（2）中，制备无菌松树成熟种子的方法为：取松树成熟种子，用洗洁精将其表面洗净，0.1%高锰酸钾浸泡12h，流水冲洗1h，在无菌条件下剥除种壳，用无菌纱布包裹去壳种子，置于70%乙醇表面消毒30~35s后再用0.1%升汞处理3~4min，用无菌水冲洗3~5次。
3.根据权利要求1所述的长期培养无菌松苗的方法，其特征在于：步骤（3）中，分装于培养容器，每个容量为30~40mL。
4.根据权利要求1所述的长期培养无菌松苗的方法，其特征在于：步骤（5）中，定期更换为每1个半月到2个半月更换一次。
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