[发明专利]一种活血化瘀的中药制剂的检测方法

权利要求书

1.一种活血化瘀的中药制剂的检测方法，该检测方法包括采用液相色谱法测定所述中药制剂，其中，所述液相色谱的条件包括：

采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；

采用以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液(V/V)为流动相B进行梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：

0～15分钟，流动相A∶流动相B＝20％-40％∶80％-60％；

15～17分钟，流动相A∶流动相B＝40％-60％∶60％-40％；

17～35分钟，流动相A∶流动相B＝60％-100％∶40％-0％；

35～37分钟，流动相A∶100％。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的条件还包括：检测波长为250nm-390nm，优选为250nm；柱温为25℃-35℃，优选为30-35℃，更优选为35℃；流速为0.6-1mL/min，优选为1mL/min。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其特征在于，采用液相色谱法测定所述中药制剂包括：

取所述中药制剂，研细，精密称定1.0250g细粉，加入50mL具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称重，超声处理15min，放冷，称重，用甲醇补足损失，摇匀，滤过，取续滤液，得到浓度为41mg/mL的样品溶液，然后采用如下液相色谱条件进行测定：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为200mm，柱内径为4.6mm的Kromasil色谱柱；

以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液(V/V)为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：0～15分钟，流动相A∶流动相B＝20％-40％∶80％-60％；15～17分钟，流动相A∶流动相B＝40％-60％∶60％-40％；17～35分钟，流动相A∶流动相B＝60％-100％∶40％-0％；35～37分钟，使用流动相A；

检测波长为250nm；

柱温为35℃；

流速为1mL/min。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：

(1)将所述中药制剂制备成浓度为25-100mg/mL的药液，然后与富血小板血浆以体积比为1∶5-10，优选为1∶8.3相混合，测定该混合液在600nm处的吸光度值；

(2)加入体积为所述药液2-4倍，优选为2倍量的浓度为10％(g/ml)的胶原，测定加入胶原后混合液在600nm处的吸光度值；

(3)按以下公式计算血小板聚集率和药物对血小板聚集抑制率：

血小板聚集率＝(加入胶原前吸光度值-加入胶原后吸光度值)/加入胶原前吸光度值

药物对血小板聚集抑制率＝(空白组血小板聚集率-给药组血小板聚集率)/空白组血小板聚集率。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：

(1)将富血小板血浆移入硅化比色杯中在37℃下温育5min，用贫血小板血浆调零，测其在600nm处吸光度值，然后用所述贫血小板血浆调节所述富血小板血浆的吸光度值在0.5-0.7之间，将2.5mL调好的富血小板血浆放入比色杯中，加入浓度为25-100mg/mL的所述中药制剂的药液0.3mL，同时调零管中加入相应浓度的所述中药制剂的药液调零，作用3min后，测吸光度值；

(2)加入10％(g/ml)浓度的胶原0.6mL，同时调零管中加入相同体积的生理盐水，分别测定加入胶原后600nm处的吸光度值；

(3)按以下公式计算血小板聚集率和药物对血小板聚集抑制率：

血小板聚集率＝(加入胶原前吸光度值-加入胶原后吸光度值)/加入胶原前吸光度值

药物对血小板聚集抑制率＝(空白组血小板聚集率-给药组血小板聚集率)/空白组血小板聚集率。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述中药制剂由丹参、三七和冰片为原料制备而成，以重量百分比计，丹参为70-85％，优选为75.13％；三七为15-25％，优选为23.54％；冰片为0.8-1.5％，优选为1.33％。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述中药制剂由丹参、三七和冰片为原料制备而成，其配比如下：丹参450g，三七141g，冰片8g。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述中药制剂的制备方法如下：

以上三味，丹参加5倍乙醇加热回流1.5小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加50％乙醇5倍，加热回流1.5小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加水12倍，煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至适量，备用；

三七粉碎成细粉，与上述浓缩液和适量的辅料制成颗粒，干燥；或将上述提取液合并，浓缩至50℃下相对密度为1.28-1.30，真空干燥，粉碎，加入过100目筛的三七细粉，加入，混匀，以85％乙醇制成颗粒，干燥；冰片研细，与0.2重量％硬脂酸镁、5重量％羧甲基淀粉钠及上述颗粒混匀，压片，即得。