[发明专利]乙醇浓度检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种乙醇浓度检测试剂盒，以及该试剂盒的制备方法。

背景技术

近年来，酒后引起的刑事案件和酒后驾车引起的交通事故案不断上升，2011年5月1日《中华人民共和国刑法修正案(八)》正式实施，醉酒驾驶作为危险驾驶罪被追究驾驶人刑事责任，有关酒驾的话题再次成为人们关注的焦点。目前，许多国家都制定了血液中乙醇浓度与交通事故责任认定的关系，建立了多种能够检测血液中乙醇含量的方法，如GM/MS法等，虽然这些方法可以准确定量，但是存在着购买仪器价格昂贵，检测成本高，需专门培训，无法在案发现场快速检测的缺点。

在我国，对醉酒驾驶的现场检测主要使用呼气式乙醇测定仪，根据国家相关规定，气体中酒精含量的检测设备有燃料电池式和半导体气敏元件式。由于检测驾驶员是否饮酒，是根据驾驶员呼出气体来测量的，呼气压力的大小直接影响测量结果，此外，呼出气体酒精含量探测器是靠空气中酒精标准气体来校准的，空气中酒精标准气体量值的准确性决定了检定结果的准确性，由于乙醇在常温下是液体，且沸点较高(78.5℃)，因挥发及汽化不完全使配制较高浓度的乙醇标准气体均匀性不太理想，这使呼出气体酒精含量探测器的检定重复性难于保证，两次检定结果相差很大，同时其价格也十分昂贵，而且不卫生，容易发生交叉感染疾病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种乙醇浓度检测试剂盒，用该试剂盒进行检测醉酒者的乙醇浓度时简便卫生、速度快、灵敏度高、稳定性高，且该试剂盒易携带、尤其适合现场检测。

一种乙醇浓度检测试剂盒，由试剂条和标准比对卡组成，其中试剂条为宽0.5-1cm的滤纸条，滤纸条上含有固相化的乙醇脱氢酶、黄递酶、氧化型INT及辅酶，标准比对卡包括不同乙醇浓度的显色比对区。

该乙醇浓度检测试剂盒的反应原理为采用循环酶法进行测定乙醇浓度。具体为：辅酶和乙醇在乙醇脱氢酶的作用下生成乙醛和还原型辅酶，生成的还原型辅酶在黄递酶的作用下，与色原物质氧化型INT(硝基四氮唑蓝)发生显色反应，生成红色的还原型INT和辅酶。反应步骤如下：

生成的红色还原型INT的颜色深浅和显色速度的快慢与样品中乙醇的浓度成线性关系。将试剂条直接放入嘴中，或蘸取少量已吐入器皿的唾液，等待10秒钟后，与标准比对卡进行比对，半定量测定醉酒者唾液中的乙醇浓度。而根据人体唾液和血液中乙醇浓度一致性的实验基础，人体唾液中乙醇浓度即人体血液中乙醇浓度。

所述辅酶为NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)、NADP(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)、thio-NAD(硫代氧化型辅酶I)中的一种。

作为优选，所述标准比对卡包括乙醇浓度分别为0mg/ml、0.2mg/ml、0.8mg/ml、1.5mg/ml、3.0mg/ml的五个显色比对区。

本发明结合循环酶法、酶比色法和酶偶联法，解决了酶比色法检测需要加入反应促进剂使反应尽快达终，但反应促进剂又对乙醇脱氢酶有抑制作用的问题，并且乙醇脱氢酶的运用保证了反应的专一性和测定的高特异性，使其灵敏度较现有技术的酶比色法大大提高。由于该试剂盒为试剂条，一人一条，非常卫生，且10秒钟即可判断检测结果，检测速度快。由试剂条和标准比对卡组成的试剂盒携带方便，尤其适合现场检测。

本发明还提供该乙醇浓度检测试剂盒的制备方法，用该制备方法制得的试剂盒在保证检测精确和准确性的同时，成本低廉。

该乙醇浓度检测试剂盒的制备方法包括试剂条的制备和标准比对卡的制备，其中：

试剂条的制备包括以下步骤：

(1)配制乙醇脱氢酶和黄递酶的酶混合液：将乙醇脱氢酶与黄递酶溶于pH 7.0-9.0的0.05-2M三羟甲基氨基缓冲液中，使每毫升缓冲液中每个酶的总活性为100-1000U；

(2)配制氧化型INT溶液：将1-10g INT溶于50-500ml乙二醇中；

(3)配制辅酶溶液：将1-10g辅酶溶于50-500ml水中；

(4)酶和底物的固相化：将滤纸浸入步骤(1)配制的酶混合液中，取出滤纸干燥；接着将步骤(2)配制的氧化型INT溶液滴在已干燥的滤纸上，干燥；然后将步骤(3)配制的辅酶溶液滴在已干燥的滤纸上，干燥；

(5)制备试剂条：将步骤(4)中干燥后的滤纸贴在单面含胶的白色聚酯板的前端，用切纸机切成宽0.5-1cm的长条，即成检测试剂条。

标准比对卡的制备步骤为：