[发明专利]乙醇浓度检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种乙醇浓度检测试剂盒，其特征在于：由试剂条和标准比对卡组成，其中试剂条为宽0.5-1cm的滤纸条，滤纸条上含有固相化的乙醇脱氢酶、黄递酶、氧化型INT及辅酶，标准比对卡包括不同乙醇浓度的显色比对区。

2.根据权利要求1所述的乙醇浓度检测试剂盒，其特征在于：所述辅酶为NAD、NADP、thio-NAD中的一种。

3.根据权利要求1所述的乙醇浓度检测试剂盒，其特征在于：所述标准比对卡包括乙醇浓度分别为0mg/ml、0.2mg/ml、0.8mg/ml、1.5mg/ml、3.0mg/ml的五个显色比对区。

4.权利要求1所述的乙醇浓度检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括试剂条的制备和标准比对卡的制备，其中：

试剂条的制备包括以下步骤：

(1)配制乙醇脱氢酶和黄递酶的酶混合液：将乙醇脱氢酶与黄递酶溶于pH 7.0-9.0的0.05-2M三羟甲基氨基缓冲液中，使每毫升缓冲液中每个酶的总活性为100-1000U，

(2)配制氧化型INT溶液：将1-10g INT溶于50-500ml乙二醇中，

(3)配制辅酶溶液：将1-10g辅酶溶于50-500ml水中，

(4)酶和底物的固相化：将滤纸浸入步骤(1)配制的酶混合液中，取出滤纸干燥；接着将步骤(2)配制的氧化型INT溶液滴在已干燥的滤纸上，干燥；然后将步骤(3)配制的辅酶溶液滴在已干燥的滤纸上，干燥，

(5)制备试剂条：将步骤(4)中干燥后的滤纸贴在单面含胶的白色聚酯板的前端，用切纸机切成宽0.5-1cm的长条，即成检测试剂条；

标准比对卡的制备步骤为：

将浓度为0mg/ml、0.2mg/ml、0.8mg/ml、1.5mg/ml、3.0mg/ml的乙醇分别滴加到制备成的试纸条上，30℃热风、避光下干燥10min，用扫描仪输入电脑中，用photoshop软件吸管测量颜色信息，根据每个浓度梯度颜色值用Photoshop6.0软件制成5个梯度的标准比色卡，即成标准比对卡。